口腔粘膜細胞のDNA認識機構の解明と口腔粘膜炎症の調節

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26463010
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 西 裕美 広島大学, 大学病院, 助教 (70403558)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 武知 正晃 広島大学, 医歯薬保健学研究院(歯), 准教授 (00304535) ; 太田 耕司 広島大学, 大学病院, 助教 (20335681)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 口腔粘膜

Outline of Annual Research Achievements

口腔粘膜細胞は細菌、ウイルスなど病原体の侵入に対して自然免疫応答に伴う特異的な防御反応を惹起すると考えられる。しかしながらヘルペスなどのDNA ウイルスに対するDNA認識機構や口腔粘膜炎症性疾患との関与は不明である。本実験はウイルス由来DNAに対する口腔粘膜上皮細胞、線維芽細胞によるDNA 認識受容体を介した口腔粘膜防御機構を明らかにし、さらに口腔粘膜炎症性疾患との関与や特異的DNA受容体を介した粘膜炎症制御、調節機構を検討する。
本年度は不死化口腔粘膜上皮細胞（RT7），不死化歯肉線維芽細胞（GT1）にHSV由来double strand DNA （HSV-ds）の細胞内導入によるCXCL10の発現誘導を定量的RT-PCR法，ELISA法によって検討した．FITCで標識したdouble strand DNA をRT7，GT1に陽イオン脂質によって細胞内導入すると、細胞質内におけるDNAの局在が示された。RT7，GT1にHSV-dsを細胞内に導入することによって両細胞でCXCL10mRNA, 蛋白の著しい発現誘導が認められた。一方、HSV DNA の添加のみやHSV single strand DNA でのCXCL10 の発現誘導は認められなかった。
これらの結果から、口腔粘膜上皮細胞、線維芽細胞はHSVのdouble strand DNAを細胞内で認識し、炎症性サイトカインを発現誘導していることが示された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

口腔粘膜上皮細胞、線維芽細胞がHSVのdouble strand DNAを細胞表面ではなく、細胞内で認識し、抗ウイルス作用や炎症の誘発に関連する白血球遊走因子であるCXCL10 が発現誘導されることを、国内外で初めて発見した。今後はDNA を細胞内で認識する受容体を検討していく。

Strategy for Future Research Activity

HSV　DNAで誘導されたCXCL10の発言誘導がAIM２などのDNA認識受容体を介する応答であるか検討するため、各種DNA、RNA認識受容体のSi欠損株を用いて、特異的DNA処理によるCXCL10の発現誘導におけるDNA受容体の影響をELISA法によって確認する。
さらに、各種DNA認識受容体の発現と局在をWesternBlotting法、蛍光検疫染色法で検討する。HSDNA認識による細胞内シグナル伝達経路を検討するため、NF-kB、EPKなど転写因子の活性をWesternBlotting法で検討する。

Causes of Carryover

現在までの達成した項目に加えて、HSV DNAで誘導されたCXCL10の発現誘導がAIM-2, IFI16などのDNA認識受容体を介する応答であるかを検討する必要がある。

Expenditure Plan for Carryover Budget

本年度中に解析が終了しなかったことから、各種DNA認識受容体の発現と局在をWestern blotting 法、蛍光検疫染色法で検討する。