唾液分泌促進に果たすシスタチンの役割

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26463027
• Research Institution: Tsurumi University
• Principal Investigator: 中川 洋一 鶴見大学, 歯学部, 准教授 (90148057)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: シェーグレン症候群 / 唾液分泌低下 / シスタチン / 自己免疫疾患 / アポトーシス

Outline of Annual Research Achievements

シェーグレン症候群の唾液腺障害にアポトーシスが係わるという考えがある。シスタチンは、カテプシン、カスパーゼ、カルパインなどのシステインプロテアーゼを阻害するシステインプロテアーゼ・インヒビターである。アポトーシスに係わるシステインプロテアーゼを制御するインヒビターは、疾患発症抑制機能を果たしている可能性が推察される。そこで、唾液分泌機能低下に及ぼすシスタチンの関与を検討した。
プロテオミクス解析によって、シェーグレン症候群と健常者の唾液タンパクのプロファイルの違いが明らかとなった。そのタンパクのひとつに、シスタチンがあり、シスタチンはシェーグレン症候群患者で著明に減少していた。ドライマウス外来患者の唾液中システインプロテアーゼ・インヒビター活性を測定したところ、シェーグレン症候群患者において著明に減少していた。唾液中シスタチンSは、Western blotting法によって、シェーグレン症候群においてタンパク量の減少が認められたが、シスタチンSA,SNは正常群との差がなかったため、シスタチンSが唾液分泌に係わるkeyタンパクと考えられた。
シェーグレン症候群の診断のために行った口唇生検組織ならびに粘液嚢胞摘出時に健常ボランティアから得られた口唇腺組織を用い、抗シスタチンＳ抗体による免疫組織染色とTUNEL染色を行いの組織学的検討を行った。その結果、漿液腺房や粘液腺房の形態的変化が大きいほどTUNEL染色陽性細胞が多く、唾液腺障害にアポトーシスが係わっている可能性が示唆された。また、形態的変化が強い唾液腺組織では、漿液半月のシスタチンＳの染色性が低下していた。以上のようなことから、通常働いているシスタチンによるアポトーシス制御機能が破綻し、唾液腺組織破壊に影響を与えている可能性が示唆された。
唾液分泌機能低下抑制へのシスタチンの関与とそのメカニズムを解明するため、培養細胞を用いて検討する。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成27年度は、培養細胞を用いて、シスタチンによるアポトーシスの阻害作用を検討した。オカダ酸の使用が適切であることを確認する作業、ならびにHSG cellにおいてFas レセプターの発現がみられるかどうかをPCRで調べることに時間がかかったが、以下の結果が得られた。
まず、HSG cellにおけるFasレセプターの発現をPCRで確認した。アポトーシスはオカダ酸によって誘導した。DAPI（4′, 6-ジアミジノ-2-フェニルインドール）を用いて、細胞染色を行い、シスタチンのアポトーシス阻害効果を確認した。

Strategy for Future Research Activity

シェーグレン症候群では唾液中のシスタチンが減少していることを見いだした。シスタチンはシステインプロテアーゼ・インヒビターである。シェーグレン症候群では活性化されたシステインプロテアーゼがアポトーシスを引き起こし、これが自己免疫病理として働くことが想定されている。これらのことは、シスタチン（システインプロテアーゼ・インヒビター）を正常化させることで唾液分泌機能低下が回復する可能性を想像させる。そこで、平成28年度は、培養細胞の機能に果たすシスタチンの効果を調べるため、細胞内シグナル伝達の異常に対するシスタチンの影響を検討する。