2016 Fiscal Year Annual Research Report
Grhl2 regulation of SPINT1 expression controls organogenesis of the embryonic salivary gland
| Project/Area Number |
26463032
|
|---|
| Research Institution | Osaka Dental University |
|---|
Principal Investigator |
吉田 博昭 大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (40260624)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
辻 要 大阪歯科大学, 歯学部, 助教 (80632083) [Withdrawn]
森田 章介 大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (90148461)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | 転写因子 / マウス胎仔顎下腺 / 器官培養 / Grainy-head like 2 / SPINT1 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
我々は唾液腺再生を目指して、マウス胎仔顎下腺形成に必要な転写因子の同定を進めている。転写因子Grhl2は、肝臓や肺のような他臓器の上皮接着の調整およびその発育に重要に関与しているとの報告があるが、唾液腺においてはその報告は未だにない。本研究では、転写因子Grhl2がその標的遺伝子である細胞膜結合型プロテアーゼ阻害因子SPINT1の発現を調節することで顎下腺形成に関与していることを報告する。
胎生12日目のマウス胎仔顎下腺をGrhl2 siRNAおよびSPINT1タンパク質の存在下で培養し、顎下腺形成への影響を解析した。その結果、Grhl2 siRNA存在下では、Grhl2の発現、上皮組織の成長および分枝形態形成が抑制され、siRNA存在下培養胎仔顎下腺でのGrhl2、SPINT1、E-cadherin、claudin、ZO-1の発現をリアルタイムPCR、ウェスタンブロットにより解析した。その結果、それぞれのタンパク発現およびmRNA発現はコントロールと比較して有意に発現が減少していた。Grhl2の標的遺伝子であるSPINT1もまた、上皮接着因子を制御することで知られており、そのコンディショナルノックアウトマウスは、マウス胎盤の栄養微絨毛の発育を阻害する報告があった。このSPINT1に着目し、Grhl2 siRNAによる顎下腺形成抑制効果は、SPINT1タンパク質を添加することで救済された。また、クロマチン免疫沈降qPCR(ChIP-qPCR)を用い、マウス顎下腺においてGrhl2抗体がSPINT1遺伝子と結合していることを確認した。
本研究は、Grhl2によるSPINT1の発現調節が器官形成に関わっていることを示す初めての報告であり、SPINT1を唾液腺障害治療薬として利用できる可能性を示唆している。
|
