2015 Fiscal Year Research-status Report
CXCR4システムを介した口腔癌の転移機構におけるmiR-518c-5pの役割
| Project/Area Number |
26463046
|
|---|
| Research Institution | Dokkyo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
内田 大亮 獨協医科大学, 医学部, 准教授 (20335798)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮本 洋二 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 教授 (20200214) [Withdrawn]
泉 さや香 獨協医科大学, 医学部, 助教 (30406227)
玉谷 哲也 徳島大学, 大学病院, 講師 (30274236) [Withdrawn]
博多 研文 獨協医科大学, 医学部, 助教 (40566642)
永井 宏和 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 准教授 (50282190) [Withdrawn]
大江 剛 徳島大学, 大学病院, 助教 (60432762) [Withdrawn]
栗林 伸行 獨協医科大学, 医学部, 助教 (80617332)
木内 誠 獨協医科大学, 医学部, 助教 (00759483)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | miR-518c-5p / exosome |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
われわれは、ケモカインレセプターCXCR4が口腔癌の転移システムの一つであることを明らかにしてきた。CXCR4システムは癌細胞の走化性亢進により転移を惹起すると考えられてきたが、転移に重要とされる癌微小環境に与える影響は不明である。われわれは、CXCR4シグナルの標的マイクロRNA (miRNA)として同定したmiR-518c-5pが、口腔癌細胞の転移促進miRNAであることを明らかにした(PlosOne 9, e115936, 2014)．本年度は，miR-518c-5pが，分泌型の転移促進miRNAとして癌微小環境へ作用しているか否か，さらにはmiR-518c-5pの標的mRNAに関して，miR-518c-5pの強制発現株であり，高転移能を有するB88-518c，CAL27-518c細胞を用い検討した．血管内皮細胞であるHUVEC細胞の増殖能と管腔形成は，B88-518cおよびCAL27-518c細胞との非接触共培養下で，有意に亢進し，miR-518c-5p阻害剤で抑制された．以上より，miR-518c-5pは分泌型miRNAとして，血管新生を促進することで，口腔癌細胞の転移能を亢進させる可能性が示唆された．そこで，培養上清中exosomeを単離し，miR-518c-5pの発現を検討した．しかしながら，購入したキットではexosomeの単離が困難であり，発現を確認することができなかった．また，cDNAマイクロアレイにて，強制発現株で発現上昇していたmRNAの発現を定量性PCRにて再確認したが，確認した３分子に関しては，変動がなかった．次年度は，これらのexosomeの単離条件の見直しと，アレイで変動したその他の分子について再検討する予定である．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
miR-518c強制発現株より分泌される分子が，血管新生を促進することは証明できたが，この結果が，exosomeに含有されたmiR-518c-5pの効果であるか証明することができなかった．miR-518c-5pの標的mRNAに関しても，明らかにすることができなかった．
|
| Strategy for Future Research Activity |
現在使用中のものとは異なるexosome単離キットを購入し，単離条件の見直しを行う．困難な場合は，超遠心法による分離も試みる．また，cDNAマイクロアレイで変動した，その他の分子について定量性PCRを行い，変動が確認された分子が転移関連分子であるか検討する．
|
| Causes of Carryover |
新部署での実験のセッティング費用に使用予定であったが，すでに購入済みの試薬器材で実験を遂行できたため，
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
exosome単離キット，LNA阻害剤，実験動物，論文掲載料への使用を予定している．
|
