2015 Fiscal Year Research-status Report
新規アメロジェニン会合蛋白の分子基盤構築による歯周組織再生の創薬標的分子の同定
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26463137
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
福田 隆男 九州大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (80507781)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西村 英紀 九州大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (80208222)
讃井 彰一 九州大学, 大学病院, 講師 (70507780)
武富 孝治 久留米大学, 医学部, 助教 (10553290)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | アメロジェニン / Grp78 / 歯根膜 / Rac1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】 EMDによる歯周外科処置に, 疼痛・腫脹の軽減を伴う治癒促進効果があることが経験的に知られているが, 実際アメロジェニンが炎症性/抗炎症性サイトカイン産生の面から抗炎症作用を示す報告が存在する. 本研究ではアメロジェニンの免疫応答に及ぼす影響を検討するために, マクロファージでのマイクロアレイによる網羅的遺伝子解析とその表現系への影響について確認した.
【材料および方法】ヒト単球系細胞株 U-937 をPMAでマクロファージへ分化誘導を行った。① マイクロアレイ解析: LPS + Amelogenin / LPS の比較で炎症関連遺伝子群の経時発現をReal-Time PCR, Western Blotとあわせて確認した。②マクロファージ表現形の検証: M1マーカー(iNOS, CD86), M2マーカー(CD206, CD163)の発現と併せて細胞形態を共焦点レーザー顕微鏡で観察した. また, growth factorsの発現についても同時に確認した.
【結果】① LPS + Amelogenin刺激群において, 抗炎症関連遺伝子TSG-6, 抗酸化関連遺伝子SOD2, 貪食促進関連遺伝子SLAMF1の特異的な亢進を確認した. ② LPS刺激ではM1型に特徴的な円状の細胞形態を呈した. 一方, Amelogenin刺激ではM2マーカー発現及び紡錘形への細胞形態の変化を確認し, さらにVEGFの遺伝子発現亢進を確認した.
【考察および結論】
アメロジェニン刺激で炎症・抗炎症作用の両方が活性化される事が示唆される一方,抗炎症遺伝子の著明な増幅が確認された. ヒートマップ解析から, アメロジェニン刺激の初期は炎症反応の亢進による炎症期間の早期収束を, 後期には抗炎症作用を促進する可能性が示唆されるとともに,M2マクロファージへの分化促進の能性が示された.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
昨年度までの経過の論文報告が受理された
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| Strategy for Future Research Activity |
【 実験動物モデルにおける新規アメロジェニン会合分子の発現の組織学的解析】
本研究では昨年度までの実験計画のin vitro実験系の結果を、in vivoで検証する。
これまでに実験動物においても組み換えアメロジェニンによる歯周組織再生が報告されている(Haze et al: J. Cell Mol Med.,13:2009)。そこで実験的歯槽骨欠損マウスにおいてアメロジェニン塗布領域での歯周組織再生とGrp78・Siglec-10の発現を、マイクロCTおよびin situハイブリダイゼーション法で確認する。同時に、アメロジェニン会合分子のsiRNAもしくは特異的誘導剤（Grp78誘導薬BIXなど)を併用しての比較検証を行う。
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| Causes of Carryover |
昨年度の研究において、高価な試薬があまり必要でなかったため
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度は昨年度のデータをもとに機能解析を進める予定のため、抗体など比較的高価な試薬が必要となる予定であり、物品費の計上に上乗せ予定である
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[Journal Article] Grp78 Is Critical for Amelogenin-Induced Cell Migration in a Multipotent Clonal Human Periodontal Ligament Cell Line.2016
Author(s)
Toyoda K, Fukuda T, Sanui T, Tanaka U, Yamamichi K, Atomura R, Maeda H, Tomokiyo A, Taketomi T, Uchiumi T, Nishimura F.
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Journal Title
Journal of Cellular Physiology
Volume: 231
Pages: 414-427
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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