2016 Fiscal Year Annual Research Report
Involvement of innate immune factor gp-340 in atherosclerosis caused by oral bacteria
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26463166
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
於保 孝彦 鹿児島大学, 医歯学域歯学系, 教授 (50160940)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
長田 恵美 鹿児島大学, 医歯学域歯学系, 助教 (00304816)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 口腔細菌 / 動脈硬化症 / gp-340 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Streptococcus mutansによる動脈硬化誘発に関与するgp-340の作用を調べるために、これまでヒト動脈内皮細胞（HAEC）、ヒト冠状動脈内皮細胞（HCAEC）を用いた。その結果、数株のS mutansは、HAEC におけるgp-340のmRNA発現レベルを上昇させたが、タンパクレベルでの発現は十分に確認できなかった。そこで本年度は、別種類の内皮細胞としてヒト微小血管内皮細胞（HMVEC）を用いて同様の実験を行った。
１． S. mutans の各血清型（c, e, f）およびStreptococcus sobrinusの各血清型（d, g）２株ずつを用いて研究を行った。それぞれの菌株をHMVECとMOI=1で48時間共培養した後、HMVECを回収し、gp-340のmRNA発現レベルを調べた。その結果、対照に比してS. mutans OMZ175は12.4倍、MT3940は7.6倍、MT8148は6.7倍の発現を示し、S. sobrinus P1は5.8倍の発現を示した。
２．gp-340のmRNA発現レベルが高かったS. mutans OMZ175を用いて、HMVECと共培養した後、HMVECを回収し、gp-340のタンパク発現レベルを調べ、以下の結果が得られた。１）gp-340は分泌型のタンパクであるが、培養上清中にはほとんど検出されなかった。２）蛍光顕微鏡観察では、HMVEC細胞体に十分なgp-340のタンパク発現は認められなかった。しかし、S. mutans OMZ175菌体の凝集塊にgp-340の存在が認められた。３）菌体との共培養後、培地中の菌体を回収したところ、Dot blot法でgp-340の定量が可能であることが示された。
３．gp-340のmRNAとタンパクの発現レベルを経時的に調べたところ、48時間共培養後に、いずれも高い発現を示すことが認められた。
４．以上の結果から、S. mutansとの共培養によりHMVECにおけるgp-340の発現が誘導されることが、mRNAおよびタンパクレベルで認められた。
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