酵素プローブを用いたRNA修飾部位網羅的探索の実践と応用

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26560442
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 鈴木 健夫 東京大学, 工学(系)研究科(研究院), 講師 (90533125)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: RNA / 化学標識 / 修飾酵素 / 網羅的探索

Outline of Annual Research Achievements

当初の計画にあったmRNAのシュードウリジンの網羅的探索に関し、昨年度に様々な他グループから複数の報告が立て続けになされた。申請者の方法論はそれらとは全く異なり単独の修飾酵素PUS1による修飾部位特定が可能となる手法と考えているが、昨今の状況を鑑み慎重に計画を進める必要があると考えている。またmRNA修飾検出手法の検討から、m6Aに対し酵素を作用させ官能基を変換し、そこにビオチンリンカーなど化学修飾の導入が可能であることを見出した。反応産物の確認をLC/MSで行いながら反応の最適化を行った。ビオチン標識RNAはアビジン濃縮が可能であり、RNA調製のスケールアップとcDNAライブラリの作成を更に進める方針とした。

Research Products

• [Journal Article] A single methylation of 23S rRNA triggers late steps of 50S ribosomal subunit assembly (2015)
  • Author(s): Arai, T., Ishiguro, K., Kimura, S., Sakaguchi, Y., Suzuki, T., Suzuki, T.
  • Journal Title: Proc Natl Acad Sci U S A Volume: 112 Pages: E4707-4716
  • DOI: 10.1073/pnas.1506749112
  • Peer Reviewed
• [Presentation] U snRNAにおけるN6-メチルアデノシン修飾の生合成と機能解析 (2015)
  • Author(s): 石神 宥真、大平 高之、穐近 慎一郎、鈴木 健夫、鈴木 勉
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド, 神戸市, 兵庫県
  • Year and Date: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [Presentation] Exploration and functional analysis of queuosine- glycosyltransferases in mammals (2015)
  • Author(s): Xuewei Zhao, Takeo Suzuki, Tsutomu Suzuki
  • Organizer: 第17回日本RNA学会年会
  • Place of Presentation: ホテルライフォート札幌, 札幌市, 北海道
  • Year and Date: 2015-07-15 – 2015-07-17
• [Presentation] Deficiency of tRNA modification causes the development of X-linked mental retardation (2015)
  • Author(s): Fan-Yan Wei, Yu Nagayoshi, Shoji Hirata, Takeo Suzuki, Tsutomu Suzuki, Kazuhito Tomizawa
  • Organizer: 第17回日本RNA学会年会
  • Place of Presentation: ホテルライフォート札幌, 札幌市, 北海道
  • Year and Date: 2015-07-15 – 2015-07-17
• [Presentation] Biogenesis of 5-taurinomethyluridine in human mitochondrial tRNAs; implication for molecular pathogenesis of mitochondrial diseases (2015)
  • Author(s): Kana Asano, Takeo Suzuki, Fan-Yan Wei, Yoshiho Ikeuchi, Yuka Yashiro, Christin Tischner, Annette Hofer, Yoshihito Kishita, Yasushi Okazaki, Tina Wenz, Kazuhito Tomizawa, Tsutomu Suzuki
  • Organizer: 第17回日本RNA学会年会
  • Place of Presentation: ホテルライフォート札幌, 札幌市, 北海道
  • Year and Date: 2015-07-15 – 2015-07-17