2014 Fiscal Year Research-status Report
コムギ無細胞産生抗原を用いたサメナノボディ作成の基盤技術開発
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26640130
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
澤崎 達也 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 教授 (50314969)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ナノボディ / サメ / 抗体 / 無細胞タンパク質合成 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
I．サメに適した抗原免疫条件の確立
１）抗サメナノボディFc領域抗体の作成：本年度は、生きたドチザメを捕獲することができなかったため、ｍRNAが入手できず、Fc領域遺伝子のクローニングができなかった。そこで人工遺伝子としてFc領域遺伝子のデザインを行った。現在、タンパク質合成に必要なコムギ無細胞タンパク質合成用のベクターへクローニング中である。タンパク質発現後は、マウスへ免疫して抗サメナノボディFc領域抗体の作成を行う。 ２）至適抗原量の決定：ドチザメ捕獲が上手く行かず、抗原の至適化は試みることができなかった。 ３）構造認識型サメナノボディ検出系の確立：本申請者は、ビオチン化リポソームとアルファースクリーニング法を組み合わせることにより、膜タンパク質の3次元構造を認識する抗体を選別する技術を開発してきた（投稿中）。抗ドチザメナノボディFc抗体が取得できていないため、サメナノボディのモデル実験として、一本鎖抗体を用いてアルファースクリーン法によるビオチン化タンパク質を認識できる系の構築を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は海水温の変化のためか、生きたドチザメの捕獲ができなかったため、ドチザメを用いた実験が実施できなかった。しかし、サメナノボディのモデルとして一本鎖抗体を用いて抗体選抜系の確立には成功した。
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| Strategy for Future Research Activity |
愛媛県水産試験場と協力して、ある程度の数のドチザメの捕獲を行う。また、希望通りのドチザメ確保が難しい場合を想定して、ドチザメ抗体のライブラリーを行っているグループとの共同研究を進めることも検討する。
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[Journal Article] MAPK Phosphatase 5 Expression Induced by Influenza and Other RNA Virus Infection Negatively Regulates IRF3 Activation and Type I Interferon Response.2015
Author(s)
James SJ, Jiao H, Teh HY, Takahashi H, Png CW, Phoon MC, Suzuki Y, Sawasaki T, Xiao H, Chow VT, Yamamoto N, Reynolds JM, Flavell RA, Dong C, Zhang Y.
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Journal Title
Cell Rep.
Volume: 10
Pages: 1722-1734
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Involvement of hepatitis C virus NS5A hyperphosphorylation mediated by casein kinase I-α in infectious virus production.2014
Author(s)
Masaki T, Matsunaga S, Takahashi H, Nakashima K, Kimura Y, Ito M, Matsuda M, Murayama A, Kato T, Hirano H, Endo Y, Lemon SM, Wakita T, Sawasaki T, Suzuki T.
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Journal Title
J Virol.
Volume: 88
Pages: 7541-7555
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Identification of RFPL3 protein as a novel E3 ubiquitin ligase modulating the integration activity of human immunodeficiency virus, type 1 preintegration complex using a microtiter plate-based assay.2014
Author(s)
Tan BH, Suzuki Y, Takahashi H, Ying PH, Takahashi C, Han Q, Chin WX, Chao SH, Sawasaki T, Yamamoto N, Suzuki Y.
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Journal Title
J Biol Chem.
Volume: 289
Pages: 26368-26382
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The apoptotic initiator caspase-8: its functional ubiquity and genetic diversity during animal evolution.2014
Author(s)
Sakamaki K, Shimizu K, Iwata H, Imai K, Satou Y, Funayama N, Nozaki M, Yajima M, Nishimura O, Higuchi M, Chiba K, Yoshimoto M, Kimura H, Gracey AY, Shimizu T, Tomii K, Gotoh O, Akasaka K, Sawasaki T, Miller DJ.
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Journal Title
Mol Biol Evol.
Volume: 31
Pages: 3282-3301
DOI
Peer Reviewed
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