真菌類感染性ウイルス“マイコウイルス”を利用した「菌類ウイルス育種学」の創設

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26640141
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 白水 貴 三重大学, 生物資源学研究科, 助教 (10571789)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森山 裕充 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (20392673)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: マイコウイルス / 木材腐朽菌 / 多様性 / 機能 / ゲノム解読

Outline of Annual Research Achievements

真菌類に感染するウイルス，マイコウイルスの未知の多様性と機能を明らかにすることを目的とし，主に木材腐朽菌から検出されたマイコウイルス由来と考えられる二本鎖RNAの塩基配列の解読を行った．10菌株より精製した二本鎖RNAを鋳型として合成したcDNAを用い，次世代シーケンサーにて塩基配列を解読したところ，2菌株に由来する二本鎖RNAからマイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の配列が得られた．これらの領域を対象としたプライマーを設計し，PCR後，サンガー法にてRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の内部配列を決定した．サンガー法にて決定されたこれらの内部配列は次世代シーケンサ―にて得られた配列と両末端を除きほぼ一致していた．
これらの領域の全配列を決定するため，RACE法による末端配列の解読を行った．それぞれの領域の両末端150bp～200bpを対象としたプライマーを設計し，RACE法およびDNAクローニングにより末端配列の解読を試みたが，目的の配列を得ることができなかった．この原因特定のためBLAST検索の結果を参照したところ，様々な生物や遺伝子由来と考えられる配列が得られていたことが分かった．このことから，おそらく，RACE用に設計したプライマー配列が適切ではなかったことが原因と考えられる．現在は新たなプライマーを設計し，反応条件を検討しなおした上で，再度RACE法による末端配列の解読を試みている．

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

マイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の末端配列を決定するためRACE法を試みているが，おそらくプライマー配列が適切でなかったため，目的の配列（両末端配列）を決定することができなかった．

Strategy for Future Research Activity

新たなプライマーを設計し再度RACE法を行うことで，マイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の全長配列を決定する．得られた配列情報を用いて系統推定および機能解析を行い，検出されたマイコウイルスの系統的位置づけと機能を推定する．

Causes of Carryover

RACE法が当初の計画通り進まず，予定されていた実験を行えなかったため，次年度使用額が生じた．

Expenditure Plan for Carryover Budget

RACE法と塩基配列決定に必要な試薬や消耗品の購入に充てる．