2015 Fiscal Year Annual Research Report
大腸菌リボソーム駆動部構成蛋白質のカセット交換による真核型合成速度の実現
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26650013
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
姚 閔 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 教授 (40311518)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 発現系 / X線結晶解析 / タンパク質工学 / リボソーム / ストーク複合体 / 翻訳速度 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
リボソームの原子レベル分解能での構造解析が完成しつつある現在，その詳細な分子構造情報をもとに，次世代型タンパク質生産系の開発に向けた展開が期待される．研究代表者らはリボソーム駆動部となる機能部位（GTPaseセンター）の主要成分であるストーク複合体の構造解析に成功し，それを構成するタンパク質が，バクテリア型と真核型の間で，カセットのように交換できることを示した．本研究では，大腸菌のストークタンパク質の一部を真核型に変換したキメラストーク複合体を用いて，真核型伸長因子EF2を運搬・利用するタンパク質合成システムの作製を試みる．これにより，大腸菌の安定したリボソームを使いながらも，真核型タンパク質のフォールド速度に対応した減速型（真核型）発現系を実現し，ヒトなどの真核生物タンパク質の可溶化発現に供する．
本研究の目的を達成するために，まず，大腸菌由来のストーク複合体の背骨タンパク質L10のキメラ体をin vitro作製する必要がある．平成27年度までに，L10の３種類の変異体L10ΔCH，L10ΔCH-P0CTD，L10ΔCH-P0H3CTDについて，様々なコンストラクトを作製し，そのうち，L10ΔCHと２種類のL10ΔCH-P0CTDの可溶化発現に成功した．また，クロマトグラフィーシステムを用いて２種類のL10ΔCH-P0CTDを精製し，Native-pageを用いたL12，P1との結合実験を行った結果，大腸菌のキメラリボソームストーク複合体を創製する可能性が示唆された．
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