2014 Fiscal Year Research-status Report
メタノール酵母のレドックス制御に基づくサイトゾル内新規タンパク質生産系の構築
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26660061
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
阪井 康能 京都大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (60202082)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | レドックス制御 / タンパク質生産 / メタノール酵母 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
メタノール資化性酵母は、強力なメタノール誘導性プロモーターを持ち、有用タンパク生産の異種遺伝子発現宿主として広く利用されている。しかし、異種タンパク質の分泌発現では、酵母内で付加された糖鎖のヒトに対する高い抗原性や小胞体ストレス惹起による発現低下が問題となる。本研究では、糖鎖付加や小胞体ストレスの惹起を避けるため、酸化的にしたサイトゾルにおいて異種タンパク質合成を行う新規生産系を確立する。
今年度は、通常還元的な環境にあるサイトゾルのレドックス状態を酸化的に調整することで、分子内にジスルフィド結合を含むトロンボモジュリンの新規フォールディング系の確立を行うため、既に見いだした培養条件やglutathione reductase 遺伝子を欠損したglr1Δ株などのサイトゾルが酸化的になっている株を含め、各種レドックス変異株を様々な培養条件において、トロンボモジュリンの発現を行ったところ、glr1Δ株のサイトゾルでの発現に成功し、かつ発現したトロンボモジュリンの生理活性を確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
有用タンパク質のサイトゾルにおけるフォールディング系を構築することができたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は、レドックス状態を Redoxfluor によりモニタリングしつつ、サイトゾルでの折りたたみ効率のより高い条件を同定する。さらに、小胞体におけるフォールディングに関わるPDI(ジスルフィド結合の掛け替え酵素)やEro1L(PDI 酸化酵素)といったほ乳類のレドックスシャペロンの過剰発現によるフォールディングの効率化を試みる。
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| Causes of Carryover |
前年度は共同研究企業からのサポートがあり、使用額が減少したため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
前年度未使用分は新規生産系の評価及び解析に使用する。
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