2015 Fiscal Year Annual Research Report
革新的な細胞ゲノム改変技術を用いたウイルス増殖制御因子の同定
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26660227
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
堀本 泰介 東京大学, 農学生命科学研究科, 教授 (00222282)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ウイルス / ゲノム編集 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ウイルスの増殖には宿主細胞の様々な細胞性因子が必須である。これら宿主因子の同定と詳細な解析は、ウイルスの生活環、病原性を理解する上で欠かせない。本研究では、新規のゲノム編集テクノロジーであるCRISPR/Cas9システムとウイルスベクターを融合させ、ウイルス増殖を制御する細胞性因子の探索を試みた。
昨年度構築したランダム標的gRNA・Cas9発現レトロウイルスベクターライブラリーを各種培養細胞に感染させた後、インフルエンザウイルス実験室株の感染に耐性となる細胞をスクリーニングした。その結果、耐性細胞株がいくつか樹立されたが、そのいずれもシアル酸レセプターの発現を抑制する表現系を示し、新規のウイルス増殖関連因子の同定には到達しなかった。
一方、ブニヤウイルス科アカバネウイルスは家畜に繁殖障害を引き起こす重要なウイルスであるが、その細胞侵入機構の詳細は不明である。いくつかの他のウイルスの侵入に関与するヘパラン硫酸プロテオグリカンのアカバネウイルスの細胞侵入への関与を調べる目的で、その合成酵素EXT2をCRISPR/Cas9によってノックアウトKOした細胞を樹立した。このKO細胞にアカバネウイルスを感染させると、その増殖は野生型細胞と比較して1/10以下に減少することがわかった。この結果から、ヘパラン硫酸プロテオグリカンがアカバネウイルスの細胞への接着に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。
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