人工ヌクレアーゼTALENを用いた遺伝子ノックアウトマダニ感染症モデルの作出

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26660229
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: 田仲 哲也 鹿児島大学, 共同獣医学部, 准教授 (00322842)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: マダニ / ゲノム / プロモーター領域 / アクチン / チュブリン / フェリチン / 昆虫細胞

Outline of Annual Research Achievements

TALENベクターの作製とノックアウトマダニの作製にあたって、平成26年度はマダニに恒常的に発現しているアクチンとチュブリンのプロモーター遺伝子領域の配列決定を行った。その結果、これらのプロモーター領域の遺伝子配列の決定することができた。
また、本研究で標的としているロンギシンをのRNAi干渉法を行ったが、ロンギシンのノックダウンが認められなかったため、ロンギシンと相同性が高いディフェンシンの同定を行った。この遺伝子についてはRNAi干渉法によって、遺伝子の抑制が観察された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

ロンギシン遺伝子ののノックダウンの確立が成功しなかったため、新たなディフェンシン分子の同定に時間を要した。そのため、当初の研究の目的の達成が遅れている。

Strategy for Future Research Activity

同定したアクチンのプロモーター領域をルシフェラーゼや緑色蛍光タンパク質を発現するベクターに組込み、昆虫細胞、マダニ細胞、マダニにトンランスフェクションを行う。また新たにチュブリンとフェリチンのプロモーター領域の同定を行う。その後、ルシフェラーゼや緑色蛍光タンパク質遺伝子の発現を確認し、遺伝子ノックアウト・ノックインマダニの作製に向けた基礎データを構築する予定である。

Causes of Carryover

平成26年度は当初予定していた研究計画が達成出来なかったため、物品の購入が滞ってしまった。しかし、当初の研究計画を見直したため、平成27年度は研究が計画通り円滑に進むことが予想される。

Expenditure Plan for Carryover Budget

平成27年度の予算使用計画は分子生物学用消耗品が主であり、その他、研究打ち合わせ・研究成果発表のための旅費、人件費・謝金、論文投稿料として使用するつもりである。

Research Products

• [Journal Article] Iron metabolism in hard ticks (Acari: Ixodidae): The antidote to their toxic diet (2015)
  • Author(s): Galay, R. L., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • Journal Title: Parasitol. Int. Volume: ６４（２） Pages: 182-189
  • DOI: 10.1016/j.parint.2014.12.005.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Identification of the Babesia-responsive leucine-rich repeat domain-containing protein from the hard tick Haemaphysalis longicornis (2015)
  • Author(s): Maeda, H., Kurisu, K., Miyata, T., Kusakisako, K., Galay, R. L., Talactac, MR., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • Journal Title: Parasitol. Res. Volume: 114（5） Pages: 1793-1802
  • DOI: 10.1007/s00436-015-4365-7.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] The widely distributed hard tick, Haemaphysalis longicornis, can retain canine parvovirus but not be infected in laboratory condition (2015)
  • Author(s): Mori H., Tanaka, T. and Mochizuki, M.
  • Journal Title: J. Vet. Med. Sci. Volume: 77(4) Pages: 405-411
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0199
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The vector potential of Haemaphysalis longicornis ticks for Babesia microti parasites under experimental condition (2015)
  • Author(s): Kusakisako, K., Maeda, H., Galay, R. L., Matsuo, T., Tsujio, M., Umemiya-Shirafuji, R., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • Journal Title: J. Protozool. Res. Volume: In press Pages: In press
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Evaluation and comparison of the potential of two ferritins as anti-tick vaccines against Haemaphysalis longicornis (2014)
  • Author(s): Galay, R. L., Miyata, T., Umemiya-Shirafuji, R., Maeda, H., Kusakisako, K., Tsuji, N., Mochizuki, M., Fujisaki, K. and Tanaka, T.
  • Journal Title: Parasit. Vectors Volume: 7（1） Pages: 482
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] フタトゲチマダニ由来2-Cys型ペルオキシレドキシン (HlPrx2) の抗酸化部位の検索 (2015)
  • Author(s): 草木迫浩大, 正谷達謄, 宮田 健, Remil Linggatong Galay, 前田大輝, 辻 尚利, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • Organizer: 第84回日本寄生虫学会大会
  • Place of Presentation: 杏林大学(三鷹市、東京都)
  • Year and Date: 2015-03-21 – 2015-03-22
• [Presentation] The role of ferritin in immunity of the ixodid tick Haemaphysalis longicornis injected with Escherichia coli (2015)
  • Author(s): Remil Linggatong Galay, Rie Takechi, Rika Umemiya-Shirafuji,Melbourne Rio Talactac, Hiroki Maeda, Kodai Kusakisako, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • Organizer: 第84回日本寄生虫学会大会
  • Place of Presentation: 杏林大学(三鷹市、東京都)
  • Year and Date: 2015-03-21 – 2015-03-22
• [Presentation] Identification of the antioxidant active sites of Haemaphysalis longicornis 2-Cys type peroxiredoxin (HlPrx2) (2015)
  • Author(s): Kodai Kusakisako, Tatsunori Masatani, Takeshi Miyata, Remil Linggatong Galay, Hiroki Maeda, Naotoshi Tsuji, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • Organizer: Joint Symposium of the 6th Veterinary Research and the 3rd Veterinary Education among Universities of Veterinary Medicine in East Asia
  • Place of Presentation: 台湾大学(台北、台湾)
  • Year and Date: 2015-02-02 – 2015-02-03
• [Presentation] ラクトフェリンによる抗マラリア原虫機能の解析 (2014)
  • Author(s): 小森園 亮, 柿本麻美子, 田仲哲也, 李 長春, 渡部久実, Ibrahim Hisham, 若林裕之,山内恒治, 宮田 健
  • Organizer: 第19回日本フードファクター学会
  • Place of Presentation: 鹿児島大学(鹿児島市、鹿児島県)
  • Year and Date: 2014-11-08 – 2014-11-09
• [Presentation] Identification and characterization of a C-type lectin like protein from the hard tick Haemaphysalis longicornis (2014)
  • Author(s): Hiroki Maeda, Takeshi Miyata, Kodai Kusakisako, Remil Linggatong Galay, Rika Umemiya-Shirafuji, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • Organizer: The 2nd Sapporo Summer Seminar for One Health
  • Place of Presentation: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • Year and Date: 2014-09-24 – 2014-09-25
• [Presentation] The critical functions of ferritins in Haemaphysalis longicornis and their potential as target molecules for tick control (2014)
  • Author(s): Galay Remil Linggatong, 白藤(梅宮)梨可, 宮田 健, 草木迫浩大, 前田大輝, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • Organizer: 第157回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • Year and Date: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [Presentation] フタトゲチマダニ由来2-Cys型ペルオキシレドキシンの機能解析 (2014)
  • Author(s): 草木迫浩大, 正谷達謄, Galay Remil Linggatong, 前田大輝, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • Organizer: 第157回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • Year and Date: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [Presentation] フタトゲチマダニ由来TNF Receptor Associated Factor(TRAF)の同定とその役割について (2014)
  • Author(s): 武智理恵, Galay Remil Linggatong, 前田大輝, 草木迫浩大, 松尾智英, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • Organizer: 第157回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 北海道大学(札幌市、北海道)
  • Year and Date: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [Presentation] フタトゲチマダニ由来Ｃ型レクチン様蛋白質の動態および機能解析 (2014)
  • Author(s): 前田大輝, 宮田健, 草木迫浩大, Remil Linggatong Galay, 白藤(梅宮)梨可, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • Organizer: 第22回分子寄生虫学ワークショップ第12回分子寄生虫・マラリア研究フォーラム合同大会
  • Place of Presentation: 帯広畜産大学(帯広市、北海道)
  • Year and Date: 2014-08-31 – 2014-09-03
• [Presentation] フタトゲチマダニ由来 2-Cys 型ペルオキシレドキシンの動態 (2014)
  • Author(s): 草木迫浩大, 正谷達謄, Remil Linggatong Galay, 前田大輝, 望月雅美, 藤崎幸蔵, 田仲哲也
  • Organizer: 第22回分子寄生虫学ワークショップ第12回分子寄生虫・マラリア研究フォーラム合同大会
  • Place of Presentation: 帯広畜産大学(帯広市、北海道)
  • Year and Date: 2014-08-31 – 2014-09-03
• [Presentation] The potential of recombinant ferritin 1 and ferritin 2 as anti-tick vaccine against Haemaphysalis longicornis (2014)
  • Author(s): Remil Linggatong Galay, Takeshi Miyata, Rika Umemiya-Shirafuji, Hiroki Maeda, Kodai Kusakisako, Masami Mochizuki, Kozo Fujisaki, Tetsuya Tanaka
  • Organizer: TTP8: Ticks and Tick-Borne Pathogens
  • Place of Presentation: Cape Sun hotel(Cape Town, South Africa)
  • Year and Date: 2014-08-24 – 2014-08-29
• [Presentation] The iron-storage and antioxidant functions of two types of ferritin are critical to successful blood feeding and reproduction of the ixodid tick Haemaphysalis longicornis (2014)
  • Author(s): Galay Remil Linggatong, Umemiya-Shirafuji Rika, Maeda Hiroki, Kusakisako Kodai, Mochizuki Masami, Fujisaki Kozo, Tanaka Tetsuya
  • Organizer: The XIIIth International Congress of Parasitoplogy
  • Place of Presentation: Camino Real Hotel（Mexico City,Mexico)
  • Year and Date: 2014-08-10 – 2014-08-15
• [Presentation] Ticks survive at a threshold between engorgement and starvation (2014)
  • Author(s): Kozo Fujisaki, Naotoshi Tsuji, Xuenan Xuan, Rika Shirafuji-Umemiya, Damdinsuren Boldbaatar, Tetsuya Tanaka, Takeshi Hatta, Banzragch Battur, Badgar Battsetseg
  • Organizer: 14th International Congress of Acarology
  • Place of Presentation: 京都テルサ(京都市、京都府)
  • Year and Date: 2014-07-14 – 2014-07-18
  • Invited
• [Book] 第2章 免疫の概念（獣医学教育モデル・コア・カリキュラム準拠 獣医免疫学） (2015)
  • Author(s): 田仲哲也、池田輝雄、岡本まり子、松本安喜（編集：池田輝雄、小川健司、松本安喜）
  • Total Pages: 17
  • Publisher: （株）緑書房
• [Book] 第6章 節足動物各論I（ダニ）（獣医学教育モデル・コア・カリキュラム準拠 寄生虫病学) (2014)
  • Author(s): 田仲哲也 （編集：堀井洋一郎、野中成晃、加藤大智、平 恵介、松本 淳、横山直明）
  • Total Pages: 5
  • Publisher: （株）緑書房
• [Remarks] 鹿児島大学 共同獣医学部獣医学科 病態予防獣医学講座 感染症学分野
  • URL: http://www.vet.kagoshima-u.ac.jp/kadai/V-infection/sinkoukansen/research.html