2014 Fiscal Year Research-status Report
エクソソーム内T-UCRコード非翻訳RNAの胃癌・前立腺癌の診断治療における意義
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26670175
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
安井 弥 広島大学, 医歯薬保健学研究院, 教授 (40191118)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | エクソソーム / ncRNA / 超保存領域（T-UCR） / 胃癌 / 前立腺癌 / 診断・治療展開 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
細胞外に分泌されエクソソームは、癌・間質相互作用、増殖・浸潤、血管新生、EMTを制御している。一方、ヒトゲノムには超保存領域 (T-UCR)から転写される非翻訳RNA（ncRNA）がエクソソーム内にも存在することが想定されている。本年度は、胃癌・前立腺癌におけるエクソソーム内に存在するT-UCR-ncRNAの発現とその機能を明らかにした上で、T-UCR-ncRNAを標的とした診断・治療への展開を目的とし、以下の通り研究を実施した。
１．胃癌・前立腺癌におけるエクソソームの調整
胃癌細胞株について、超遠心法によりエクソソームを準備した。エクソソームの確認は、CD63にて行なった。さらに、エクソソーム膜に存在するtetraspanin 8のsiRNAノックダウンによっても確認した。
２．特徴的T-UCR-ncRNAの発現解析と機能解析
胃癌および前立腺癌におけるT-UCRの発現とメチル化による制御、癌に特徴的に発現亢進を示すT-UCRの同定とその発現制御並びに下流遺伝子の探索を行なった。代表的T-UCRの発現を胃癌細胞株・前立腺癌細胞株およびそれぞれの正常組織とで比較したところ、胃癌・前立腺癌ともに癌で発現低下を示すT-UCR（Uc.118+A, Uc.158+A, Uc.241+A, Uc.244+, Uc.249+,等）の多いことが分かった。その内、Uc.158+Aでは転写調節領域が癌において高頻度にメチル化されており、ルシフェラーゼアッセイによってメチル化による転写活性低下が確認された。一方、癌で発現亢進していた3種のT-UCRの内、Uc.416+Aでは臨床検体においても癌における発現亢進が確認された。生物学的機能解析では、siRNAによるノックダウンにより細胞増殖能が有意に抑制された。Uc.416+Aの発現制御機構、下流の標的遺伝子に関する検討を行なっている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度の計画通り、胃癌細胞株についてエクソソームの調整を行なうことができた。手法が確立されたため、前立腺癌細胞株および組織サンプルについても順次滞りなく調整することができる。また、代表的なT-UCRの発現解析では、癌細胞株と正常組織との比較で抽出した発現異常を示すT-UCRについて、臨床サンプルに対する定量的RT-PCRにより、いくつかのT-UCRでは発現異常が確認できた。機能解析に関しても、組織サンプルにおける発現と臨床病理学的事項との相関解析に加え、MTTアッセイ、invasionアッセイを行い、T-UCRの生物学的特性制御に関する知見を得ることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の計画に従って研究を推進する予定である。即ち、T-UCR-ncRNAとmiRNAの発現相関解析とその制御に関わるmiRNAの同定と転写活性の検証、特徴的T-UCR-ncRNAと臨床病理学的事項・治療情報との関連解析、Liquid biopsy診断系の確立ならびにsiRNA等による治療実験、等である。技術的、設備的には問題なく遂行することができる。
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[Journal Article] Tetraspanin 8, identified by the Escherichia coli ampicillin secretion trap, is associated with cell growth and invasion in gastric cancer2015
Author(s)
Anami K, Oue N, Noguchi T, Sakamoto N, Sentani K, Hayashi T, Naito Y, Oo HZ, Yasui W
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Journal Title
Gastric Cancer
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] High miR-21 expression from FFPE tissues is associated with poor survival and response to adjuvant chemotherapy in colon cancer2014
Author(s)
Oue N, Anami K, Schetter AJ, Moehler M, Okayama H, Khan MA, Bowman ED, Mueller A, Schad A, Shimomura M, Hinoi T, Aoyagi K, Sasaki H, Okajima M, Ohdan H, Galle PR, Yasui W, Harris CC
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Journal Title
Int J Cancer
Volume: 134
Pages: 1926-1934
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] MiroRNA-148a is down-regulated in gastric cancer, targets MMP7 and indicates tumor invasiveness and poor prognosis2014
Author(s)
Sakamoto N, Naito Y, Oue N, Sentani K, Uraoka N, Oo HZ, Yanagihara K, Aoyagi K, Sasaki H, Yasui W
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Journal Title
Cancer Science
Volume: 105
Pages: 236-243
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] miR-145 is a potential prognostic factor of scirrhous type gastric cancer2014
Author(s)
Naito Y, Yasuno K, Tagawa H, Sakamoto N, Oue N, Yashiro M, Sentani K, Goto K, Shinmei S, Oo HZ, Yanagihara K, Hirakawa K, Yasui W
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Journal Title
Oncology Reports
Volume: 32
Pages: 1720-1726
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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