2015 Fiscal Year Research-status Report
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26670387
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
奥瀬 千晃 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (00318940)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山本 博幸 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 准教授 (40332910)
伊東 文生 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (90223180)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 肝細胞癌 / Sorafenib / 治療効果予測 / DNAメチル化 / VEGFR / PDGFR / pyrosequencing |
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| Outline of Annual Research Achievements |
肝細胞癌においてはRaf-1 シグナル伝達経路とVEGFシグナル伝達経路が重要な役割を担うが、Sorafenib治療に対して30-40％の無効例が認められる。治療効果予測因子の確立により、効果的な患者選択と治療遂行が可能となるが、現状ではSorafenibの治療効果予測に有用な指標は存在しない。本研究では、Sorafenibの治療効果予測因子確立を目的として、研究を行った。
シグナル受容体であるVEGFR とPDGFR のDNAメチル化解析に関し、肝癌細胞株を用いて解析したDNAメチル化が、必ずしも発現低下と相関しなかった。そのため、計画を変更し、複数の肝癌細胞株の脱メチル化剤処理による再発現解析に基づき、機能的意義を有するDNAメチル化の検討から行うこととした。その結果、いくつかの重要なCpG領域を明らかにした。これに基づき、primerの再設計を行い、biotinated-primerを用いて、サンプルDNAをビオチン化させPCR増幅し、遺伝子発現と相関するpyrosequencing法を用いたDNAメチル化解析法を確立した。
さらに、末梢血中遊離DNAおよび肝細胞癌組織切片から腫瘍部のみを、laser microdissection and pressure catapulting (LMPC)システムを用いて採取、抽出したDNAを用いて、VEGFR とPDGFR のDNAメチル化PCRの条件を至適化できた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
27年度に、VEGFR とPDGFR のDNAメチル化の解析を行い、その結果を基に末梢血中遊離DNA 等を用いてメチル化解析を進める予定であったが、肝癌細胞株を用いて解析したDNAメチル化が、必ずしも発現低下と相関しなかった。そのため、計画を変更し、肝癌細胞株の脱メチル化剤処理による再発現解析に基づき、機能的意義を有するDNAメチル化の検討から行うこととした。結果的に、遺伝子発現と相関するpyrosequencing法を用いたDNAメチル化解析法を確立したが、全体の達成度に遅れを生じた。
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| Strategy for Future Research Activity |
延長が認められた28年度においては、確立に成功した、遺伝子発現と相関するpyrosequencing法を用いたDNAメチル化解析法を用いて、末梢血遊離DNA等を用いた研究を推し進めていく。
また、肝細胞癌組織における遺伝子変化がどの程度、末梢血遊離DNAに反映されるかの検討を行う。各研究項目の連携を強化し、研究全体の遂行、目標の達成に向けて邁進する。
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| Causes of Carryover |
27年度は、所有していた試薬消耗品を使用して、肝癌細胞株の脱メチル化剤処理による再発現解析に基づき、機能的意義を有するDNAメチル化の検討から行った。結果的に、遺伝子発現と相関するpyrosequencing法を用いたDNAメチル化解析法を確立したが、全体の達成度に遅れを生じ、28年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
28年度は、研究項目が多岐にわたるため、主に試薬消耗品購入に使用する。
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