肥満・メタボリック症候群に対する新しい治療薬の開発：ARIA阻害化合物の合成

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26670406
• Research Institution: Kobe Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 池田 宏二 神戸薬科大学, 薬学部, 准教授 (90423871)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: PTEN / ARIA

Outline of Annual Research Achievements

ARIA-PTEN結合阻害作用を有する低分子化合物であるcompound-30 (C30)と類似の構造を有する低分子化合物を６８化合物選抜した。これらC30類似化合物のARIA-PTEN結合阻害作用をmKGアッセイと免疫沈降法を用いて解析した。その結果、４つのC30類似化合物がARIA-PTEN結合阻害作用を示したが、残念ながらその作用はいずれもC30より弱かった。一方、MTSアッセイによる細胞毒性の評価では、ほぼ全てのC30類似化合物がC30より低い細胞毒性を示した。以上、C30と類似の構造を有する化合物の機能評価の結果、C30を超えるARIA-PTEN阻害作用を有する化合物を発見することが出来なかった。また期間中にmKGアッセイの感度を上げるための最適化を実施した。いくつかの培養細胞株を使用したが、当初使用していたCHO-K1細胞が最もmKGアッセイに適していることがわかった。次にトランスフェクションに使用するリポフェクタミンの量とPTEN, ARIA発現ベクターの量を様々な組み合わせで実行した。その結果、ARIA:PTEN=1:3の割合でリポフェクタミン1.5ul/24-wellで最も高い感度を得られることがわかった。今後はC30と異なる基本骨格を有するARIA阻害化合物のスクリーニングを新たに実施する予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

Compound-30類似化合物の細胞毒性およびARIA-PTEN阻害作用の評価は概ね予定通り終了している。

Strategy for Future Research Activity

Compound-30類似化合物は細胞毒性は低いものの、ARIA-PTEN結合阻害作用ではC30を凌駕することができなかった。これら結果からC30に変わる新たなシード化合物の探索が必要であると考えている。そのためには、mKGアッセイよりも高感度でハイスループットなアッセイ法が必要であり、現在は新たなアッセイ系の開発を進めている。