• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2014 Fiscal Year Research-status Report

小児急性白血病の発症前診断法の開発

Research Project

Project/Area Number 26670503
Research InstitutionEhime University

Principal Investigator

石井 榮一  愛媛大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20176126)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 江口 真理子  愛媛大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40420781)
江口 峰斉  愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (50420782)
Project Period (FY) 2014-04-01 – 2016-03-31
Keywords小児血液学 / 白血病 / 融合遺伝子
Outline of Annual Research Achievements

MLL-AF4融合遺伝子のゲノム上の転座切断点は、MLL遺伝子上のイントロン5からエクソン11までの約8.3kbと、AF4遺伝子のイントロン3から6(約48kb)に集中している。これらの領域に0.7~2kbの間隔で複数のプライマー(MLL側に12個、AF4側に32個)を設計し、PCRにて転座切断点の検出を試みた。MLL-AF4融合遺伝子陽性白血病細胞株を検体として用いた。AF4遺伝子上の32個のリバースプライマーを8個ずつ4セットに分けてMLL遺伝子上の12個のフォワードプライマー全てを混合して行ったPCRでは各細胞株で少なくとも一つのセットで増幅産物が得られ、MLL-AF4融合遺伝子を検出可能であった。12個のフォワードプライマーと32個のリバースプライマーを混合して1本のチューブで行ったPCRでも各細胞株で同様にMLL-AF4融合遺伝子を検出可能であった。
TEL-AML1融合遺伝子に関しては、ゲノム上の転座切断点はほとんどの症例で、TELのイントロン5(約15kb)とAML1遺伝子のイントロン1(約150kb)に集中している。TEL遺伝子のイントロン5に15個のフォワードプライマーを設定し、AML1遺伝子のイントロン1に52個のリバースプライマーを設定した。MLL-AF4融合遺伝子と同様に、AML1遺伝子上のリバースプライマーを13個ずつ4セットに分けてTEL遺伝子上の15個のフォワードプライマーと混合して行ったPCRでは十分にゲノム上のTEL-AML1融合遺伝子を検出可能であった。これらの方法は白血病細胞株のみでなく、患者検体を用いた解析にも問題なく応用でき、迅速にゲノム上の転座切断点を同定できる実験系を作製できた。
これらのPCRの検出感度は白血病細胞のDNA 100 pgまでであり、この方法での融合遺伝子の検出には白血病細胞が20個程度必要であると思われた

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

MLL-AF4およびTEL-AML1融合遺伝子のゲノム上の転座切断点の迅速な同定方法は確立できた。ごく少数の白血病細胞を含む血液検体での融合遺伝子の検出は試行中であるが、まだ方法は確立していない。

Strategy for Future Research Activity

基本的は迅速検出方は確立したが、白血病細胞の混入が少ない場合にはPCRでの特異的な産物の増幅が不安定であり、方法を改善する必要がある。当初の目的である早期診断のためのスクリーニングへの応用には実験方法のさらなる改良が必要であり、今後も検討を続けていく。また方法が確立した後に実際に臍帯血などを用いて、TEL-AML1、MLL-AF4融合遺伝子のスクリーニングを行い、白血病の早期診断への応用の可能性について検討する予定である。

Causes of Carryover

初年度に本研究計画のために購入予定であったPCR装置(Applied Biosystems Veriti 96-Well Fastサーマルサイクラー、一式98万円)の購入を見合わせ、本研究室で保有するPCR装置および学内共同実験施設のPCR装置を使用したため、当初予算より使用経費が少なくなり、次年度使用額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

研究計画の遂行に高性能なPCR装置が必要となる可能性は高く、次年度に繰り越した予算を用いて必要な装置の購入を行う予定である。

  • Research Products

    (18 results)

All 2015 2014

All Journal Article (12 results) (of which Peer Reviewed: 12 results,  Open Access: 1 results) Presentation (6 results)

  • [Journal Article] Adiponectin/resistin levels and insulin resistance in children: a four country comparison study.2015

    • Author(s)
      Takemoto K, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Int J Pediatr Endocrinol

      Volume: 2015 Pages: 1-12

    • DOI

      10.1186/1687-9856-2015-2

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Tsukamurella inchonensis infection in a child with Hodgkin's lymphoma2015

    • Author(s)
      Ochi, F, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Pediatr Int

      Volume: 57 Pages: e7-10

    • DOI

      10.1111/ped.12472

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Postnatal interleukin-1beta administration after experimental prolonged febrile seizures enhances epileptogenesis in adulthood2015

    • Author(s)
      Fukuda, M, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Metab Brain Dis

      Volume: in press Pages: in press

    • DOI

      10.1007/s11011-014-9648-7

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Carnitine deficiency: Risk factors and incidence in children with epilepsy2015

    • Author(s)
      Fukuda, M, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Brain Dev

      Volume: in press Pages: in press

    • DOI

      10.1016/j.braindev.2014.12.004

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Identification of CD34+ and CD34- leukemia-initiating cells in MLL-rearranged human acute lymphoblastic leukemia2015

    • Author(s)
      Aoki, Y, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Blood

      Volume: 125 Pages: 967-980

    • DOI

      10.1182/blood-2014-03-563304

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] KL-6 as a biomarker of respiratory complications in severely disabled children2015

    • Author(s)
      Ochi, F, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Pediatr Int

      Volume: in press Pages: in press

    • DOI

      10.1111/ped.12537

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Procalcitonin as a marker of respiratory disorder in neonates2015

    • Author(s)
      Ochi, F, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Pediatr Int

      Volume: 57 Pages: 263-268

    • DOI

      10.1111/ped.12505

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Early use of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation for infants with MLL gene-rearrangement-positive acute lymphoblastic leukemia2015

    • Author(s)
      Koh, K. Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Leukemia

      Volume: 29 Pages: 290-296

    • DOI

      10.1038/leu.2014.172

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Lineage-dependent skewing of loss of heterozygosity (LOH) of KRAS gene in a case of juvenile myelomonocytic leukemia2015

    • Author(s)
      Tokuda, K. Ishii, E. et al.
    • Journal Title

      Eur J Haematol

      Volume: 94 Pages: 177-181

    • DOI

      10.1111/ejh.12355

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Ulk1-mediated Atg5-independent macroautophagy mediates elimination of mitochondria from embryonic reticulocytes2014

    • Author(s)
      Honda, S. Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Nat Commun

      Volume: 5 Pages: 4004

    • DOI

      10.1038/ncomms5004

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] CLTC-ALK fusion as a primary event in congenital blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm2014

    • Author(s)
      Tokuda, K. Ishii, E. et al.
    • Journal Title

      Genes Chromosomes Cancer

      Volume: 53 Pages: 78-89

    • DOI

      10.1002/gcc.22119

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Postnatal interleukin-1beta enhances adulthood seizure susceptibility and neuronal cell death after prolonged experimental febrile seizures in infantile rats2014

    • Author(s)
      Fukuda, M, Ishii, E, et al.
    • Journal Title

      Acta Neurol Belg

      Volume: 114 Pages: 179-185

    • DOI

      10.1007/s13760-013-0246-y

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] HMGA2 as a potential molecular target in MLL-AF4 positive infant acute lymphoblastic leukemia.2014

    • Author(s)
      石前峰斉、石井榮一ら
    • Organizer
      The 56th annual meeting of the American Society of Hematology
    • Place of Presentation
      San Francisco, USA
    • Year and Date
      2014-12-07
  • [Presentation] 骨髄炎との鑑別が困難であった前駆B細胞性リンパ芽球型リンパ腫の一例2014

    • Author(s)
      森谷京子、石井榮一ら
    • Organizer
      第56回日本小児血液・がん学会
    • Place of Presentation
      岡山
    • Year and Date
      2014-11-30
  • [Presentation] 生後早期に発症したMLL-AF4陽性乳児急性骨髄性白血病の一例2014

    • Author(s)
      武洲英、石井榮一ら
    • Organizer
      第56回日本小児血液・がん学会
    • Place of Presentation
      岡山
    • Year and Date
      2014-11-28
  • [Presentation] HMGA2阻害剤によるMLL-AF4陽性乳児急性リンパ性白血病細胞の増殖抑制効果2014

    • Author(s)
      石前峰斉、石井榮一ら
    • Organizer
      第76回日本血液学会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2014-10-31
  • [Presentation] A case of late onset FHL with missense mutation in UNC13D gene.2014

    • Author(s)
      中野直子、石井榮一ら
    • Organizer
      The 16th Biennial Meeting of the European Society for Immunodeficiencies (ESID 2014)
    • Place of Presentation
      Prague, Czech Republic
    • Year and Date
      2014-10-29 – 2014-11-01
  • [Presentation] 心臓浸潤を認めたホジキンリンパ腫の一例2014

    • Author(s)
      森谷京子、石井榮一ら
    • Organizer
      第117回日本小児科学会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2014-04-11

URL: 

Published: 2016-05-27  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi