2014 Fiscal Year Research-status Report
ヒトiPS細胞由来肝臓の成熟過程の解析を目指したライブイメージング系の構築
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26670585
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
関根 圭輔 横浜市立大学, 医学部, 助教 (00323569)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
武部 貴則 横浜市立大学, 医学部, 准教授 (20612625)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 再生医学 / 幹細胞 / 肝疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)法を用いてノックイン細胞を樹立するためには、ノックインの対象となる標的遺伝子特異的TALENの作製とノックインのために蛍光遺伝子を組み込んだ相同組み換えベクターの作製が必要である。そこでまず既知の肝内胚葉マーカーであるαフェトプロテイン、HNF4、アルブミン遺伝子に対し蛍光レポータータンパク質を発現する蛍光遺伝子ノックインiPS細胞の樹立を目的に、標的遺伝子特異的TALENの作製と相同組み換えベクターの作製を実施した。更にこのTALENとターゲティングベクターをヒトiPS細胞に導入し複数の相同組み換えiPS細胞の樹立に成功した。
さらに、ヒトiPS細胞から肝内胚葉細胞へ分化誘導する各分化段階の細胞のマイクロアレイデータより新たな肝内胚葉細胞特異的マーカー候補の抽出を進めた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初計画していた、既知の肝内胚葉マーカーに対するノックインに必要なベクター類の構築を完了し、ヒトiPS細胞での相同組み換え体の取得にも成功した。さらに、当初予定していなかったヒトiPS細胞から肝内胚葉細胞へ分化誘導する各分化段階の細胞のマイクロアレイデータを入手したため(申請者らが別の研究プログラムで実施)、新たな肝内胚葉細胞特異的マーカー候補の抽出を進めることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
取得した相同組み換えヒトiPS細胞株を分化誘導し、可視化が可能か否か検討する。分化段階を追って経時的に観察し、蛍光タンパク質の発現が標的遺伝子の遺伝子発現レベルを正確に反映しているか否か検証する。新たな肝内胚葉細胞特異的マーカー候補遺伝子についてはqPCRでの発現確認をすると共に、複数のiPS細胞株での検証を行い、真にヒトiPS細胞から肝内胚葉細胞へ分化誘導する際のマーカーとなりうるか検証を行い、この検証が速やかに達成されたならば、当該標的遺伝子に対するノックインiPS細胞の樹立に着手する。
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Research Products
(19 results)
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[Journal Article] Polycomb group protein Ezh2 regulates hepatic progenitor cell proliferation and differentiation in murine embryonic liver.2014
Author(s)
Koike H, Ouchi R, Ueno Y, Nakata S, Obana Y, Sekine K, Zheng YW, Takebe T, Isono K, Koseki H, Taniguchi H.
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Journal Title
PLoS One. 2014 Aug 25;9(8):e104776.
Volume: 9
Pages: e104776
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Evidence of a sophisticatedly heterogeneous population of human umbilical vein endothelial cells.2014
Author(s)
Zheng YW, Nie YZ, Tsuchida T, Zhang RR, Aoki K, Sekine K, Ogawa M, Takebe T, Ueno Y, Sakakibara H, Hirahara F, Taniguchi H
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Journal Title
Transplant Proc.
Volume: 46
Pages: 1251-1253
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The CD133+CD44+ precancerous subpopulation of oval cells is a therapeutic target for hepatocellular carcinoma.2014
Author(s)
Zheng YW, Tsuchida T, Shimao T, Li B, Takebe T, Zhang RR, Sakurai Y, Ueno Y, Sekine K, Ishibashi N, Imajima M, Tanaka T, Taniguchi H.
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Journal Title
Stem Cells Dev.
Volume: 23
Pages: 2237-2249.
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Ring1B promotes hepatic stem/progenitor cell expansion through simultaneous suppression of Cdkn1a and Cdkn2a in mice.2014
Author(s)
Koike H, Ueno Y, Naito T, Shiina T, Nakata S, Ouchi R, Obana Y, Sekine K, Zheng YW, Takebe T, Isono K, Koseki H, Taniguchi H.
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Journal Title
Hepatology.
Volume: 60
Pages: 323-333
DOI
Peer Reviewed
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