二次元培養下での脱分化軟骨細胞の再分化促進因子／低分子化合物の網羅的探索

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26670662
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 藤田 香里 京都大学, iPS細胞研究所, 特定研究員 (10633092)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 軟骨細胞 / 脱分化 / 再分化 / 低分子化合物ライブラリー / siRNA ライブラリー

Outline of Annual Research Achievements

化合物ライブラリーによる脱分化型軟骨細胞の再分化を誘導する候補化合物を１次、２次スクリーニングによりピックアップした。しかしながら、これまでの実験より、脱分化阻止や再分化には１０日前後の培養基間が必要なことが判ってきたため、化合物添加を２回行い、最終的に１０日間の培養を行う系に変更し、１次スクリーニングを行った。現在、１次スクリーニングの再現性と２次スクリーニングの実施を検討中である。
siRNAライブラリースクリーニングでは、導入効率やノックダウン効率などの実験の基本となる部分は昨年度に完了していた。しかしながら、前述のように脱分化阻止や再分化には１０日前後の培養基間が必要であり、導入したsiRNAの効果が平均３～４日であることから、siRNAの導入を２～３回行い１０日間の培養を試みた。２～３回のsiRNAの導入は、導入試薬の影響と思われるダメージを細胞に与えることが判明した。現在、shRNAライブラリーの使用に移行し、脱分化阻止の系を行い、候補分子の同定まで終了した。