2015 Fiscal Year Research-status Report
単一ドメイン抗体によるグラム陰性菌Ⅲ型病原毒性の抑制探索
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26670791
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
佐和 貞治 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10206013)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
天谷 文昌 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60347466)
中嶋 康文 関西医科大学, 医学部, 教授 (70326239)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 緑膿菌 / 単一ドメイン抗体 / 多剤耐性菌 / 抗体療法 / 三型分泌システム / V抗原 / PcrV / 抗体医薬品 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、高度多剤耐性を示す緑膿菌(MDRP)による感染が増加しており、新しい治療法の開発が求められている。期待される特異的な抗体療法の中で、重鎖(H鎖)のみで形成されている単一鎖抗体(VHH抗体)が自然界においてラクダ等で発見されたことから、抗原認識の最小単位としての単一ドメイン抗体(sdAb)が感染症に対する新しい抗体医薬品として期待される。緑膿菌は、多くの病原性グラム陰性桿菌と同様に、Ⅲ型分泌システムを用いて毒素タンパクを標的真核細胞の細胞質へ直接転移させることで病原性を発揮するが、この分泌装置の構造タンパクであるV抗原（PcrV）に対する抗体が分泌毒性を抑制できる。今回、この緑膿菌PcrVに対する遺伝子組換え単一ドメイン抗体を作成し、緑膿菌の感染症に対する新しい抗体医薬品としての可能性を探求した。これまでにまず、精製用のタグを除去したタグレス遺伝子組み換えタンパクの作成・精製を達成した。これにより高い抗原性を持つタグ部分に対する抗体生成の懸念を除去できた。次に、マウスモノクローナル抗PcrVブロッキング抗体mAb166の重鎖、軽鎖より、可変部位遺伝子を組み合わせた短鎖sdAbをファージディスプレイシステムとして作成した。今後、この抗体の予防・治療効果について動物モデルを用いて検証していく。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初の予定を変更し、高い抗原性を持つ精製用のタグを除去したタグレス遺伝子組み換えタンパクの作成・精製を行った。これにより高い抗原性を持つタグ部分に対する抗体生成の懸念が除去できたため、今後、より安定的な抗体探索が可能となったが、そのために動物モデルによる抗体の評価等に当初の計画からは少し遅れが発生している。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、作成したMab166由来の遺伝子組み換え短鎖モノクローナル抗体を精製し、この抗体の予防・治療効果について動物モデルを用いて検証していく。また、タグレス遺伝子組み換えタンパクを用いた、当初の計ラマ抗体の生成にも挑戦する。
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| Causes of Carryover |
遺伝子組み換えタンパクの精製方法を変更したために、全体の進行に少し遅れが生じたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
緑膿菌PcrVに対する短鎖抗体を精製して、その効果を動物モデルにて評価する。
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