2015 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子プロモーター活性を指標とした生細胞分離技術の確立
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26670815
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
小崎 健一 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (50270715)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
十川 紀夫 松本歯科大学, 歯学部, 教授 (30236153)
十川 千春 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (10253022)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 発現制御 / 遺伝子 / 癌 / 発生・分化 / 移植・再生医療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、「人体のあらゆる細胞を自由自在に単離できる」新たな生細胞分離法の確立を目指して、目的とする細胞で特異的に発現する遺伝子プロモーター配列を蛍光レポーター系ベクターへ組み込んだGene Promoter Activity Detection (gPAD)システムの作成・検証を行った。従来の抗原抗体反応による生細胞分離法では、マーカーとしうる抗原分子が細胞表面に局在し、それに対する特異的抗体が作成可能な分子に限られるため、分離可能な細胞も限定されていた。しかし、本研究で確立を試みたgPADシステムは、遺伝子の転写活性を指標とした蛍光レポーター系であり、限られた表面抗原やその特異抗体に依存せず、全ての遺伝子での応用が可能であるので、本研究の達成は医学生物学における研究領域全般へ大きく貢献する可能性を含んでいると考えられる。
本研究では、初年度より癌における上皮-間葉転換(EMT)異常との関連性が指摘されている上皮系マーカー遺伝子であるE-カドヘリン(CDH1)や間葉系マーカー遺伝子として知られているビメンチン(VIM)のプロモーター配列等をgenomic PCR法により単離、それらの配列における転写活性を確認し、単離したプロモーター領域を蛍光レポーター系ベクターへ組み込んたgPADシステムの作成・検証を進めてきた。特にVIM/gPADシステムについては、胃癌細胞株 MKN1へ導入後、独自のcell-based reporter systemによる328種類のmicroRNA (miRNA)配列の機能的スクリーニングを実施し、新規癌EMT誘導性miRNAであるmiR-544aを同定した。さらに、CDH1とAXIN2がmiR-544aの直接的標的分子であり、miR-544aがTGF-β経路ならびにWNT経路を活性化しEMTを促進させる事を明らかにし、gPADシステムの創薬における機能的スクリーニング・モデルとしての有用性を報告した(Yanaka Y, et al, Carcinogenesis, 2015)。
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Research Products
(4 results)
