2014 Fiscal Year Research-status Report
唾液中の細胞を標的としたフローサイトメトリーによる新しい口腔内科診断戦略
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26670854
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
北川 善政 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (00224957)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大賀 則孝 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (40548202)
佐藤 淳 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (60319069)
浅香 卓哉 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (80637265)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | フローサイトメトリー / 口腔内科 / 唾液 / 細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
日常臨床では、口腔カンジダ症、口腔扁平苔癬、慢性再発性アフタにおける難治性症例に遭遇する。これらの疾患においては免疫系の異常が報告されているが、病因に関しての詳細は分かっていない。このような症例では、口腔内における局所免疫系の破綻・ゆがみ、つまり免疫系の構成細胞の割合の変化がおきているのではないかと着想した。本研究では、今年度健常者の唾液中の免疫細胞の構成割合をフローサイトメトリーを用いて解析した。研究方法としてはガムテストを行い、10分間の刺激時唾液を採取した。コントロールとして血液を用いた。唾液と血液を蛍光抗体(CD3、CD4、CD45)で染色し、実際の構成細胞の割合をフローサイトメトリーで解析した。唾液はさまざまな不純物が混濁しており、粘稠である。前処理せずに解析を行うとフローサイトメトリーの流路系で閉塞が起こり正確な測定はできない。そこで、今回以下の工夫を行った。ショ糖勾配法による単核球分画の回収や②40μmのフィルター濾過し上皮系細胞などを除去した。免疫系細胞を効率よく回収できたと考えている。これにより、問題なくフローサイトメトリー解析の実験を行うことができるようになった。解析により唾液中のCD3、CD4、CD45陽性細胞（汎血球細胞マーカー）が存在することを明らかにできた。現在、FITC、PE、APCの３種類の蛍光抗体を同時に多重染色し、構成細胞の割合を測定している。今後、口腔カンジダ症、舌痛症、慢性再発性アフタ等の口腔粘膜疾患特有の細胞成分のパターンが得られることができるかを詳細に検討予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ほぼ当初の計画どおり研究課題が達成されている。学会発表のみならず論文として結実させるのが課題である。
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| Strategy for Future Research Activity |
下記に示す計画どおりに研究課題を遂行予定である。
1) 唾液中のNK cellマーカーのフローサイトメトリー解析
2) 口腔癌患者の唾液中のおけるがん幹細胞マーカーCD44, CD133の発現解析
3) 健常者と扁平苔癬、舌痛症、シェーグレン症候群、唾液腺症患者の唾液中細胞の
4) フローサイトメトリー解血液腫瘍患者の唾液中の白血球細胞の構成割合、細胞異形の解析
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| Causes of Carryover |
実験のサンプルが揃わなかったため一部実験が遅れている。次年度に物品を購入予定である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
現在実験は計画どおりに進んでいる。次年度に学会発表、国際誌に投稿を予定している。
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