ケミカルバイオロジーを応用した次世代型歯周組織再生治療薬のシーズ開発

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26670893
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 山田 聡 大阪大学, 歯学部附属病院, 講師 (40359849)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 野崎 剛徳 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (30263304) ; 北垣 次郎太 大阪大学, 歯学部附属病院, 助教 (90570292)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 歯周再生モデル

Outline of Annual Research Achievements

1）マウス実験的歯周炎モデルにおける解析：
in vivoスクリーニング系を構築するために、マウスにおけるFGF-2局所投与のタイミングと濃度を決定することを目的として、絹糸結紮による実験的歯周炎を惹起し、同歯周炎部にリコンビナントFGF-2を局所投与した。すなわち、マウスの上顎第2大臼歯へ絹糸を結紮した。14日間の留位後、絹糸を除去し、局所の急性炎症の消退を図るために、除去後、2日あるいは3日経過した後に様々な濃度もリコンビナントFGF-2を歯周炎局所にマイクロインジェクションした。絹糸結紮から21日目に同マウスにおける歯槽骨の再生量を、マイクロCTにより解析した。その結果、絹糸除去から局所投与まで2日あるいは3日の間隔をあけることで、FGF-2投与が局所炎症を増悪させることは回避されることが示唆された。また、歯槽骨再生には、濃度0.05%のFGF-2が適性であることが示唆された。
2）in vitroスクリーニング系の確立：
FGF-2と結合能を有するPLAP-1分子を利用して、PLAP-1を欠損した胎児由来線維芽細胞（PLAP-1KO MEFs）および同分子を発現している野生型MEF（WT MEFs）に対して、標識されたリコンビナントFGF-2を作用させ、細胞表面上に結合するFGF-2量をフローサイトメーターにて定量化することで、FGF-2作用因子のスクリーニング実験系の構築を試みた。その結果、細胞表面に結合するFGF-2量は、WT MEFsと比較して、PLAP-1KO MEFsでは、低下していることが明らかとなり、様々なタンパク・分子にて前処理したMEFs細胞を用いて、標識FGF-2の同細胞表面への結合量を比較検討することで、FGF-2制御因子のスクリーニング系が構築できる可能性が示唆された。