マルチ機能タンパク質DNA-PKcsの神経発生における役割

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26740019
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 黒沢 綾 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 客員研究員 (70505867)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: DNA依存性プロテインキナーゼ / 非相同末端連結

Outline of Annual Research Achievements

平成26年度は、プロモーターレス型ベクターを用いてiPS細胞の遺伝子ターゲティングを行うための条件検討と（２）ヒトNalm-6細胞からのiPS細胞の樹立の条件検討を行った。
（１）遺伝子ターゲティングを行う際、ベクター導入後の細胞を単一分散培養するが、ヒトiPS細胞を単一分散培養すると、多分化能の消失や細胞死を招く。そこで、多能性幹細胞としての性質を保持した組換え体を効率よく取得するため、ターゲティングベクターを導入したiPS細胞の培養を選択培地に切り替える時期や用いる選択薬剤の至適濃度を検討した。また、薬剤選択によって生じたコロニーの単離時期や方法、培養条件についても検討した。
（２）当初計画していた方法（Yun et al. Science (2007) 318:1917）では、Nalm-6細胞からiPS細胞を樹立することはできなかった。そこで、shRNAによるp53の発現抑制や、初期化しなかったNalm-6細胞の増殖を低分子化合物により抑制するなど、iPS細胞樹立のための条件を検討している。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の計画に従い、PRKDC遺伝子欠損ヒトiPS細胞の作製を進めている。

Strategy for Future Research Activity

平成27年度は、昨年度に引き続き、PRKDC遺伝子を破壊したiPS細胞の作製に取り組む。その後、得られた細胞を用いて、DNA-PKcs欠損が神経細胞の分化過程にもたらす影響を調べる。

Causes of Carryover

平成26年度中に必要な試薬類を揃えることができたため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

平成27年度分の予算とともに、実験に必要な試薬の購入に充当する。