終末糖化産物に着目した糖尿病併発膵癌促進蛋白質の同定及び柑橘類含有化合物の作用

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26750056
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 高田 尊信 金沢医科大学, 総合医学研究所, 助教 (20515308)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 食習慣 / 糖尿病 / 膵癌 / 生活習慣病 / TAGE

Outline of Annual Research Achievements

従来から、糖尿病と膵癌の発症、進展には関連性があると考えられている。しかし、糖尿病患者における膵癌発生・増悪因子の解明は殆ど進んでいない。また糖尿病をはじめとする生活習慣病の主因と考えられるtoxic AGEs (TAGE) と膵癌の発症・進展に関する研究は全く検討されていない。
そこで、平成26年度は、高血糖条件下の膵管癌細胞内でのTAGE生成が細胞自身に及ぼす影響を検討した。高グルコース培地で培養したヒト株化膵管癌細胞PANC-1にTAGE前駆体グリセルアルデヒド (GA)を添加した結果、GA濃度依存的に細胞生存率の低下が認められた。並行してPANC-1の免疫染色を行い、GA濃度依存的に、細胞内でのTAGE生成の増加が観察された。
細胞内で生成する微量のTAGEを定量するためのSlot-blot法の改良に取り組み、TAGEの検出感度を従来法よりも30倍以上に高めた「微量TAGE定量法」を開発した。現在、PANC-1以外の細胞も含めて、本手法による微量TAGEの定量を実施中である。
また、ウェスタンブロッティング法 (WB法) によって、細胞内TAGE化蛋白質の分子量を解析した。抗TAGE特異抗体及び中和抗体を用いて詳細に解析した結果、特異的なTAGE化蛋白質のバンドが複数観察された。さらに、「膵癌関連タンパク質」のWB解析を行った結果、TAGE化によりその存在量に増減が見られ、現在、細胞死とこれらのTAGE化蛋白質の関連を検討中である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ほぼ、当初の計画通りに進行している。

Strategy for Future Research Activity

当初の予定通り、今年度は平成26年度の研究成果をふまえ、次の4つのプロジェクトを遂行する。
1. TAGE前駆体のGA添加によりTAGE化を受けた膵癌関連タンパク質と細胞死の関連性を検討する。
2. 二次元電気泳動を駆使し、細胞内TAGE化蛋白質の網羅的解析を検討する。
3. 柑橘類などの食品成分による、細胞内TAGE生成阻害活性を検討する。
4. 膵癌細胞にTAGE化蛋白質を添加し、細胞外TAGEが細胞死などに与える影響に関しても検討する。