2015 Fiscal Year Annual Research Report
オリゴＤＮＡを用いた新技術による転写活性化機構の解析と再生医療への応用
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26830130
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
仲島 由佳 筑波大学, 生命環境系, 助教 (40399499)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 転写 / DNAオリゴヌクレオチド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでに、DNAオリゴヌクレオチド（ジーンジャックオリゴDNA：オリゴDNA）により標的遺伝子の転写を活性化出来ることを見出し、その活性化機構の解析を行った。本年度は、医療応用への可能性の検討を行った。
はじめに、オリゴDNAによる細胞脱分化誘導の検討を行うために、マウス繊維芽細胞（MEF）に脱分化誘導因子（Oct3/4, Sox2, KLF4, c-Myc）のオリゴDNAを導入し、その発現量を検討した。その結果、それぞれ単独又は４因子同時にそれぞれのmRNAレベルが増加することを確認した。次に、人工多能性幹細胞の誘導が可能かどうかを検討するために、まず、３因子（oct3/4, Sox2, KLF4）発現プラスミドを導入したMEFにc-MycのオリゴDNAの導入を行った。その結果、コントロールよりもc-MycオリゴDNAを加えた方が未分化マーカーであるAP陽性のコロニー数が増加し、Nanogなどの未分化マーカー遺伝子のmRNA量が増加していることを確認した。またTAIL-PCR法により、c-MycオリゴDNAの宿主ゲノムDNAへのインテグレーションは検出されなかった。これらの細胞を用いてテラトーマ形成試験を行い、得られたテラトーマをHE染色した結果、多分化能を保持していることを確認した。以上の結果から、オリゴDNAにより、細胞脱分化の誘導が可能なことが証明された。
次に、オリゴDNAのin vivo投与によるインスリン生産の検討を行うために、インスリンを標的としたオリゴDNAをハイドロダイナミック法によりマウスの肝臓に投与し、インスリン遺伝子の転写活性化を試みた。はじめに、ポジティブコントロールとしてEGFPプラスミドの投与を行ったが、投与から２４時間、４８時間後に観察した結果、EGFPのシグナルは肝臓において検出出来なかった。そのため、投与方法の再検討が必要である。
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