2016 Fiscal Year Annual Research Report
Development of novel diagnostics and treatment for spinal cord injury using blood concentration of phosphorylated neurofilament heavy chain
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26850193
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
藤原 玲奈 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 特任助教 (60456176)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 脊髄損傷 / バイオマーカー / リン酸化ニューロフィラメント重鎖 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度、犬のリン酸化ニューロフィラメント重鎖（NF-H)タンパクの配列情報を基に作製したペプチド抗原より、ウサギおよびニワトリでポリクローナル抗犬NF-H抗体を作製した。最終年度はこれらの抗体を用いたサンドイッチELISA測定系を確立を目標とした。まず、犬正常脊髄に対する免疫染色で評価したところ、既存の抗NF-H抗体と比較し、神経軸索に特異的に反応し、同等の免疫染色性を示した。次に、常法に従い、ELISA測定系を組み立て、既存のELISAキットにて、pNF-H濃度が既知のサンプルを用いて測定したところ、血液サンプルでの検出が可能であった。血中に漏出するNF-Hはリン酸化を受けていると考えられていることから、ペプチド抗原により作製した抗体を用いたELISA測定系が利用可能と考えれた。現在、定量性および、測定時間の短縮を目指して測定系の改良を行っており、今後、日常的な臨床現場での応用を目指す。
また、これまで、血中pNF-Hの濃度変化がもつ意義について不明であったため、最終年度はラット脊髄損傷モデルにおける血中pNF-Hの濃度変化を検討し、脊髄損傷の進行や代謝とpNF-Hの関連を検討することとした。これまで、ラットにおいては、損傷後3日目で血中濃度がピークに達することが明らかになっていることから、脊髄損傷後3日目のピーク時に血清を採取、保存した。血中濃度が十分に正常化し、検出されないと予想される、損傷後1か月において、血中に戻した後、経時的に採決を行い血清中pNF-H濃度を測定することで、血中半減期をまず明らかにする予定である。
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