2014 Fiscal Year Research-status Report
未承認GMの峻別を可能とするイネ種子エピゲノムの一粒プロファイリング
| Project/Area Number |
26860091
|
|---|
| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
|---|
Principal Investigator |
中村 公亮 国立医薬品食品衛生研究所, 生化学部, 主任研究官 (60570926)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | カルス / 種子 / 遺伝子導入 / ゲノム / DNAメチル化 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
イネ由来のハウスキーピング遺伝子Actin 1プロモーターは、イネなど単子葉植物の遺伝子組換え（GM）作物の開発に汎用されている。発芽前、特に乾燥状態の種子中の遺伝子発現は不活性化されており遺伝子発現が休眠状態にある。Actin 1プロモーター上のシトシンのメチル化は遺伝子発現制御に大きくかかわっている可能性がこれまでの研究より明らかとなった。また、そのメチル化パターンは発芽時に大きく変動することを示唆するデータを得た。そこで、本年度では、イネ種子より通常条件下（28℃, pH5.7）で発芽させた種子よりカルス細胞を得て再分化後7週間までのサンプルを採取してActin 1プロモーターのDNAメチル化に関する解析を中心に行った。カルス細胞を採取する種子は、野生型イネ（日本晴品種）およびActin 1プロモーター制御下でGFPを発現させるコンストラクトが導入されたGMイネ（日本晴品種を基に作成）を使用した。Actin 1プロモーターのDNAメチル化修飾パターンを導入型（GM）と内在型（非GM）とで比較した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度はイネ種子からカルス培養を行い、カルス細胞の再分化誘導を行うプロトコルを立ち上げた。カルス細胞からの再分化誘導後、最大3か月間イネを育成させる必要があった。今後は、初年度に立ち上げたカルスからの再分化プロトコルに従って、様々な環境下で育成させたイネより抽出したゲノムDNA上の内在性遺伝子ActIプロモーターのDNAメチル化パターン解析を行っていく予定である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
初年度に立ち上げたカルスからの再分化プロトコルに従って、温度（20℃又は37℃）、pH（4.5又は8.0）、浸透圧（マンニトール3%又は8%）、紫外線照射（有又は無）で再分化誘導させたカルス細胞中の内在性遺伝子ActIプロモーターのDNAメチル化パターンを解析する。その際には、actin 1プロモーターのDNAメチル化修飾パターンを導入型（GM）と内在型（非GM）で比較するため多変量解析する。
|
| Causes of Carryover |
カルス培養及び再分化誘導栽培に時間がかかり、研究対象試料の調製が遅れ、解析が当初の計画よりも遅れてしまった。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年度は研究対象試料の準備が整ったため、バイサルファイトシーケンシングに必要な試薬代とシーケンシング代に昨年度支出予定分を追加で支出する。リアルタイムPCR用のプライマープローブが高価なため、最終年度に購入を予定している。
|
-
[Journal Article] Comparison of the specificity, stability, and PCR efficiency of six rice endogenous sequences for detection analyses of genetically modified rice2015
Author(s)
Takabatake, R., Onishi, M., Futo, S., Minegishi, Y., Noguchi, A., Nakamura, K., Kondo, K., Teshima, R., Mano, J., Kitta, K.
-
Journal Title
Food Control
Volume: 50
Pages: 949-955
Peer Reviewed
-
[Journal Article] A novel trait-specific real-time PCR method enables quantification of genetically modified (GM) maize content in ground grain samples containing stacked GM maize2015
Author(s)
Noguchi, A., Akiyama, H., Nakamura, K., Sakata, K., Minegishi, Y., Mano, J., Takabatake, R., Futo, S., Kitta, K., Teshima, R., Kondo, K., Nishimaki-Mogami, T.
-
Journal Title
European Food Research and Technology
Volume: 240
Pages: 413-422
Peer Reviewed
-
-
-
[Journal Article] Development of pBT63, a positive control plasmid for qualitative detection of genetically modified rice2014
Author(s)
Minegishi, Y., Mano, J., Takabatake, R., Nakamura, K., Kondo, K., Kato, Y., Kitta, K., Akiyama, H.
-
Journal Title
Japanese Journal of Food Chemistry and Safety
Volume: 21
Pages: 48-56
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Development of direct real-time PCR system applicable to a wide range of food and agricultural products2014
Author(s)
Mano, J., Hatano, S., Futo, S., Minegishi, Y., Ninomiya, K., Nakamura, K., Kondo, K., Teshima, R., Takabatake, R., Kitta, K.
-
Journal Title
Food Hygiene and Safety Science
Volume: 55
Pages: 25-33
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
[Presentation] A novel transgenic construct-specific real-time PCR detection method for genetically modified salmon in foods2014
Author(s)
Nakamura, K., Kondo, K., Akiyama, H., Kobayashi, T., Noguchi, A., Nagoya, H., Takabatake, R., Kitta, K., Plouffe, D., Buchanan, J., Nishimaki-Mogami, T.
Organizer
128th AOAC Annual Meeting & Exposition
Place of Presentation
Florida, USA
Year and Date
2014-09-07 – 2014-09-10
-
-
-
-
-
