2014 Fiscal Year Research-status Report

次世代シークエンサーによるポリオーマウイルス関連メルケル細胞癌の病態規定因子解明

Research Project

Project/Area Number	26860238
Research Institution	Tottori University
Principal Investigator	松下倫子鳥取大学, 医学部, 助教 (70642198)
Project Period (FY)	2014-04-01 – 2017-03-31
Keywords	CADM1 / MCPyV / immunohistochemistry
Outline of Annual Research Achievements	メルケル細胞癌（MCC）は高齢者に多い予後不良な皮膚の神経原性悪性腫瘍である。本研究課題はMCPyV の感染が影響を及ぼしている病態規定因子を解明し、MCPyVとMCCの病態解明や治療法開発のために役立てることである。本年度は以下の成果を得た。 (1)Real-time PCRにて感染の有無が確認済みのMCPyV陽性MCC16例、MCPyV陰性MCC16症例を用い、作製したMCPyVのST領域に対する抗体（ST-1）の免疫染色（IHC）及びST mRNA -in situ hybridization（ISH）を行い、染色によるMCPyV感染の有無の感度、特異度をMCPyVの検出に通常使用されているMCPyVのLTに対する抗体（CM2B4）によるIHCと比較検討を行ったところ、感度に関してはST mRNA-ISHはCM2B4-IHCと同等、特異度に関しては、ST-1-IHC及びST mRNA-ISHはCM2B4-IHCより優れていることが示され、予後良好なMCPyV陽性MCCをより正確に同定できることが示唆された。 (2)MCPyV非感染例では細胞質が感染例と比べ広く、核の辺縁が不整となることをが示されているが、この形態学的差異を生み出す因子は解明されていない。マイクロアレイデータベースで登録されているメルケル細胞癌の網羅的遺伝子解析データを収集した。細胞骨格、接着に関連する遺伝子の発現変動に注目し、二群比較、Gene Ontology解析、pathway解析を複数の統計学的手法を用い再解析を実施し、得られたデータから細胞接着因子であるCADM1遺伝子を候補とした。また、CADM1及びDAL-1、MAL、MPP3に関する解析をMCPyV陽性、MCPyV陰性MCC症例を用い行った。CADM1、DAL-1、MALに関してMSP解析により、それぞれ、1/18、15/27、1/13症例でhypermethylationが示された。また、IHCでは、MPP3は1例のみで発現がみられ、MCPyV陰性症例はMCPyV陽性症例に比べCADM1の高発現、MALの低発現が示され、予後不良との関連が示唆された。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 本年度の研究でMCPyV陽性及び陰性MCCの予後因子を示唆することができた。また、研究成果について学会発表を予定しており、論文を作成中である。
Strategy for Future Research Activity	本年度の成果(2)のCADM1遺伝子等に関して細胞を使用したRNA干渉実験の最中であり引き続き行う。また、MCPyV陽性MCC、MCPyV陰性MCC症例を用い、AID及びMAP kinase signaling系等の解析を行う予定である。
Causes of Carryover	購入した消耗品で一部、安く購入することのできた品があった。
Expenditure Plan for Carryover Budget	研究に必要な試薬及び消耗品等に使用予定である。