2014 Fiscal Year Research-status Report
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26860261
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
高岸 麻紀 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 特別研究員(RPD) (10723918)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 胃がん / Wntシグナル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、非古典的Wntシグナル経路を調節する蛋白Dapleを用いて、胃がんの進行過程における分子メカニズムと組織像の関係を明らかにすることを目的としている。研究実施計画に沿って、以下の研究を行った。
１．古典的Wntシグナルのネガティブフィードバック機構を解明：まずはDaple分子が古典的・非古典的Wntシグナル経路によって発現誘導されるのか検討するために、培養細胞を用いてWnt3aまたはWnt5a刺激し、リアルタイムPCRによって発現誘導を解析した。また、Daple発現プラスミドの導入による強制発現、またはRNAiによるDaple発現抑制を行い、古典的Wntシグナル経路によるTCF転写活性をルシフェラーゼアッセイにて検出した。
２．非古典的Wntシグナル経路による進行胃がんの浸潤・転移の制御：非古典的経路のリガンドWnt5aを強発現している胃がん細胞KKLSにDaple shRNAを導入し、Daple蛋白を発現抑制した転移胃がん細胞株を作製した。Controlと共にTrans-well migration assay, Invasion asaayを行った結果、胃がん細胞の移動や浸潤はDaple発現抑制によって抑えることができた。
３．胃がん各ステージにおける古典的・非古典的Wntシグナル経路の活性化を解析：各ステージの胃がん手術検体を100例ほど集めて、病理標本から組織切片を作製した。beta-cateninの核局在やWnt5aの高発現によって、古典的・非古典的Wntシグナル経路の活性化を評価した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
研究実施計画の中でもDaple発現抑制した胃がん細胞の樹立や、病理標本の免疫染色は予定より早く実験系を立ち上げることができた。計画当初はDaple免疫染色の染色法法を検討するにとどめていたが、すべての標本で免疫染色が完了した。
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| Strategy for Future Research Activity |
免疫染色した病理標本の結果と臨床データから統計解析し、古典的・非古典的Wntシグナル経路の活性化と胃がんの進行度との関連性を明らかにする。
また、Daple発現抑制した胃がん細胞株をマウスに移植し、Controlとともに転移能を調べる。
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| Causes of Carryover |
当該年度は病院で保管している病理標本を使用して切片を作製し、HE染色や免疫染色を行った。既存のサンプルと染色液や抗体を使用できたため、物品費を使用しなかった。次年度には培養細胞を用いた実験や、マウスを購入する予定なので、物品費を多く要する次年度に使用する。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
培養細胞に遺伝子導入したり、RNAを回収する際の試薬や培養消耗品に多く使用する。また、サンプルの処理やリアルタイムPCRなどに用いる試薬セットや機器使用費を要する。
マウスに胃がん細胞を移植する実験系のため、動物実験設備やヌードマウスの購入費、手術器具や標本作製の消耗品に使用する計画がある。
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[Journal Article] TRIM27/MRTF-B-Dependent Integrin β1 Expression Defines Leading Cells in Cancer Cell Collectives.2014
Author(s)
Takuya Kato, Atsushi Enomoto, Takashi Watanabe, Hisashi Haga, Sumire Ishida, Yuji Kondo, Koichi Furukawa, Takeshi Urano, Shinji Mii, Liang Weng, Maki Ishida-Takagishi, Masato Asai, Naoya Asai, Kozo Kaibuchi, Yoshiki Murakumo, Masahide Takahashi.
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Journal Title
Cell reports.
Volume: 7
Pages: p1156-1167
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Regulation of cargo-selective endocytosis by dynamin 2 GTPase-activating protein girdin.2014
Author(s)
Liang Weng, Atsushi Enomoto, Hiroshi Miyoshi, Kiyofumi Takahashi, Naoya Asai, Nobuhiro Morone, Ping Jiang, Jian An, Takuya Kato, Keisuke Kuroda, Takashi Watanabe, Masato Asai, Maki Ishida-Takagishi, Yoshiki Murakumo, Hideki Nakashima, Kozo Kaibuchi and Masahide Takahashi.
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Journal Title
The EMBO Journal
Volume: 33
Pages: p2098-2112
DOI
Peer Reviewed
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