2014 Fiscal Year Research-status Report
痛み反応に関与する分界条床核外側部CRHニューロンの電気生理学的解析 その2
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26860388
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
萩原 裕子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教 (90468207)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | パッチクランプ法 / 分界条床核外側部 / Venus / 痛み / DARPP32 / ホルマリン / シナプス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、パッチクランプ法による電気生理学的な手法を用いて、分界条床核外側部のCorticotropin releasing factor (CRF) 陽性ニューロンの電気生理学的な特徴と痛みの関係を調べることにある。そのためには、CRHのプロモーターの下流に蛍光物質を発現させた遺伝子組み換えマウスの存在が必須となる。これまで色々と試みたが、現在進行している研究では、CRH遺伝子のVenusノックインマウスを用いて、電気生理学的な解析を行うことを目的にしている。いくつかの研究をおこなっているが、これまでは有用なマウスの作成に至っていない。現在はC57BL/6N-Crh<tm1(Venus)Ksak>マウス（CRF (Corticotropin releasing factor)遺伝子のvenus ノックインマウス（エクソン２の開始コドンATGにVenus-frt-flanked-PGK-neoカセットが挿入されているマウス））からPKG-neo cassetteを除いたCRF-VenusΔNeoマウスを使用することを目的としている。Venus蛍光強度がより強い改変型であり、視床下部室傍核、分界条床核外側部などのCRF発現細胞にてVenus由来の強い蛍光を示す（Endocrine Society OR17-6）。従って今回の実験に最適なマウスと考え実験に使用したい。同時に、同じ部位でドーパミンニューロンのdopamine- and cAMP-regulated phosphoprotein 32 kD (DARPP32)の蛍光を発するB6.Cg-Tg(Drd1a-tdTomato)6Calak/Jマウスを用いて、分界条床核外側部Dopamine D1受容体発現細胞に対して同様の実験を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
パッチクランプ法による電気生理学的な手法を用いて、分界条床核外側部のCorticotropin releasing factor (CRF) 陽性ニューロンの電気生理学的な特徴と痛みの関係を調べる。そのためには、CRHのプロモーターの下流に蛍光物質を発現させた遺伝子組み換えマウスの存在が必須となる。その作成にいまだ成功していないため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今回の研究では、CRH遺伝子のVenusノックインマウスを用いる。これまで、レポーターをつかった遺伝子組み換え動物では作成成功に至っていない。蛍光物質の発光が弱すぎることに起因すると思われる。今回はC57BL/6N-Crh<tm1(Venus)Ksak>マウス（CRF (Corticotropin releasing factor)遺伝子のvenus ノックインマウス（エクソン２の開始コドンATGにVenus-frt-flanked-PGK-neoカセットが挿入されているマウス））からPKG-neo cassetteを除いたCRF-VenusΔNeoマウスを使用する。Venus蛍光強度がより強い改変型であり、視床下部室傍核、分界条床核外側部などのCRF発現細胞にてVenus由来の強い蛍光を示す（Endocrine Society OR17-6）。従って今回の実験に最適なマウスと考え実験に使用する。同時に、同じ部位でドーパミンニューロンのdopamine- and cAMP-regulated phosphoprotein 32 kD (DARPP32)の蛍光を発するB6.Cg-Tg(Drd1a-tdTomato)6Calak/Jマウスを用いて、分界条床核外側部Dopamine D1受容体発現細胞に対して同様の実験を行っている。
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| Causes of Carryover |
備品ピブラトームは別の予算で購入され、また、ジェノタイプのために必須のPCR機器が壊れたため代替え機を購入し、その差額がでたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度は、今年度やり残した電気生理学的な解析で消耗品がかなり見込まれるので、それらに使用する。
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