2014 Fiscal Year Research-status Report
ファイブロサイトに注目したクローン病腸管狭窄機序の解明及びその治療方法の開発
Project/Area Number |
26860525
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Research Institution | Keio University |
Principal Investigator |
徳武 美奈 慶應義塾大学, 医学部, 研究員 (30468524)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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Keywords | 腸管線維化 / ファイブロサイト / 腸炎 |
Outline of Annual Research Achievements |
マウスモデルを用いた腸管線維化へのfibrocyteの関与の解明 腸管線維化におけるfibrocyte の役割・メカニズムを明らかにするため、詳細な解析が可能なマウスモデルの作成を実施した。当研究室では既に、fibrocyte の同定やCollagen 産生細胞の追跡が飛躍的に容易になる、Collagen-GFP マウスと、TNFαの過剰な産生による腸管線維化を発症するTNF⊿ARE マウスを導入済みであった。これらを用いて腸管線維化におけるfibrocyte の関与を明らかにする計画である。現在までに、Collagen GFP マウスを用いたbone marrow キメラマウスの作成を完了した。正常マウスにX線を照射することでRecipient由来の骨髄細胞を除去した後、DonorマウスであるCollagen-GFPマウスの骨髄細胞を経静脈的にRecipientマウスに投与した。移植処置を行ったマウスでは骨髄死が抑制され、脾臓中にCD45陽性Collagen陽性細胞が検出されたことから、Recipientマウスの骨髄細胞をCollagen-GFPマウス由来の骨髄細胞によって再構築することが出来たと考えられた。
腸管の線維化と発癌に関する検討 近年、組織線維化が発癌に関与する可能性が注目されている。潰瘍性大腸炎では大腸癌が頻発するが、そのメカニズムは不明である。そこで、本研究計画で使用しているCollagen-GFPマウスを用いて腸管線維化と発癌の関連についてメカニズム解明検討を行うこととした。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マウスモデルを用いた腸管線維化へのfibrocyte の関与の解明 概ね順調に進捗している。平成26年度中にCollagen-GFPマウス由来の骨髄キメラマウスを作成することが出来た。本モデルマウスを用いた慢性DSSモデルによる腸管線維化へのfibrocyteの関与の解明についても現在データ取得中である。さらに、腸管線維化と発癌に関する検討のため、炎症性発癌のモデルマウスであるDSS-AOMモデルを起ち上げた。
fibrocyte の分化制御機構のin vitro における解析 当初の計画を変更し、マウスモデルを用いた腸管線維化へのfibrocyteの関与の解明を先行して実施した。マウスの検討から注目すべきメカニズムに目途がついた段階で、クローン病患者と健常人の末梢血を用いた検討を行うなどして、腸管線維化におけるfibrocyte の役割をクローン病の病態と関連づけて理解したい。
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Strategy for Future Research Activity |
マウスモデルを用いた腸管線維化へのfibrocyte の関与の解明 Collagen-GFPマウス由来の骨髄キメラマウスを用いて、腸管線維化の疾患モデル系である慢性Dextran Sodium Sulfate(DSS)モデルによって腸管線維化へのfibrocyteの関与の解明を検討する。慢性DSSモデルはDSSの経口投与(5 日間)により惹起される急性期の腸炎から回復し、腸管の線維化が認められる慢性期(3~4 週間後)で評価を行うものである。本モデルをCol GFP マウス由来の骨髄キメラマウスで実施し、Flow Cytometor による末梢血中のfibrocyte の検出やケモカイン等、他のマーカーによるchallacterization を行う。さらに、腸管線維化部位でcollagen 陽性細胞がどのようなタイムコースでどの部位にどの程度浸潤するかを病理学的に解析することで、骨髄由来細胞やfibrocyte の腸管線維化への関与やそのメカニズムに関する考察を得る。さらに、TNFαの過剰産生というクローン病と非常に近いサイトカイン環境を持つTNF⊿ARE マウスでfibrocyte の検出を行い、腸管線維化とfibrocyte の関係を明らかにする。また、fibrocyteの分化制御機構のin vitroに於ける解析については、これらのマウスモデルの検討の結果、注目すべきメカニズムに目途がついた段階で、クローン病患者と健常人の末梢血を用いて検討を実施する。
腸管の線維化と発癌に関する検討 Collagen-GFPマウスを用いて炎症性の腸管発癌モデルであるDSS-AOMを行う。この時、線維化を惹起するために繰り返しDSSを投与する。線維化した腸管から癌部及び非癌部のcollagen陽性細胞をGFPをマーカーに単離し、癌部のcollagen陽性細胞のcharacterizationを行う。
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