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2014 Fiscal Year Research-status Report

iPS細胞を用いた孤発性パーキンソン病の病態解明と標的分子の同定

Research Project

Project/Area Number 26860666
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

山門 穂高  京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10378771)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2016-03-31
Keywordsパーキンソン病
Outline of Annual Research Achievements

比較的均一な患者群と考えられるGBAヘテロ接合体変異を持つ孤発性パーキンソン病(PD)患者よりiPS細胞を樹立する目的で、京大病院通院中の患者約130名のGBA遺伝子のシークエンスを行った。L444P、R120W、c.1447_1466delinsTGなど6名のGBA変異PD患者を同定した。うち、RecNci1、L444P、R120W変異PD患者についてiPS細胞を樹立した。iPS細胞の遺伝子修復によるisogenic control作製について、まずHEK293細胞にてpilot研究を行った。CRISPR/cas9によるゲノム編集のため、L444をtargetとしたguide RNAを設計しcas9 plasmidとともにtransfectionを行い編集を試みた。結果、10%程度の確率でゲノムの改変を確認した。今後iPS細胞でのゲノム編集を試みる予定である。iPS細胞由来ドパミン神経細胞の純化について、corinによるsortingは回収率が低いため、dopamine transporterの細胞外loopに対する抗体を用いてsortingの可能性を検討中である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

iPS細胞の遺伝子修復によるisogenic control作製について、まずHEK293細胞にてpilot研究を行ったが、ゲノム編集の成功率が10%程度と想定外に低く、iPS細胞でのゲノム編集に困難が予想された。また、iPS細胞由来ドパミン神経細胞の純化について、corinによるsortingは回収率が低いことが判明した。

Strategy for Future Research Activity

iPS細胞の遺伝子修復によるisogenic control作製について、まずHEK293細胞にてより効率の良いゲノム編集を模索し、L444P以外にr120Wもtargetとしてゲノムの改変を行う。また、健常siblingからのiPS作製も視野に入れて研究を進める。iPS細胞由来ドパミン神経細胞の純化については、corin以外にdopamine transporterの細胞外loopに対する抗体を用いてのsortingを行っていく。

Causes of Carryover

ゲノム編集によるiPS細胞のisogenic control作製に遅れが認められたため、マイクロアレイなどによる網羅的解析を行っていないことが大きな理由の一つである。

Expenditure Plan for Carryover Budget

マイクロアレイによるRNAやタンパク質の網羅的解析に予算を使用する予定である。

  • Research Products

    (5 results)

All 2015 2014

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results,  Open Access: 4 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Viable Neuronopathic Gaucher Disease Model in Medaka (Oryzias latipes) Displays Axonal Accumulation of Alpha-Synuclein.2015

    • Author(s)
      Uemura N, Koike M, Ansai S, Kinoshita M, Ishikawa-Fujiwara T, Matsui H, Naruse K, Sakamoto N, Uchiyama Y, Todo T, Takeda S, Yamakado H, Takahashi R.
    • Journal Title

      PLOS Genetics

      Volume: 11 Pages: e1005065

    • DOI

      10.1371/journal.pgen.1005065

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Advance in PD research explored a new field on ubiquitin biology.2014

    • Author(s)
      Yamakado H.
    • Journal Title

      Movement Disordes

      Volume: 29 Pages: 1243

    • DOI

      doi: 10.1002/mds.25977

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Two cases of acute onset of focal cortical reflex myoclonus following acute aseptic meningoencephalitis with positive anti-glutamate receptor autoantibody.2014

    • Author(s)
      Tojima M, Hitomi T, Jingami N, Tanioka K, Yamakado H, Matsumoto R, Takahashi Y, Ikeda A, Takahashi R.
    • Journal Title

      Rinsho Shinkeigaku

      Volume: 54 Pages: 543-549

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Exploring the pathogenetic mechanisms underlying Parkinson's disease in medaka fish.2014

    • Author(s)
      Matsui H, Uemura N, Yamakado H, Takeda S, Takahashi R.
    • Journal Title

      Journal of Parkinsons Disease

      Volume: 4 Pages: 301-310

    • DOI

      10.3233/JPD-130289

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] Therapeutic approach to Parkinson’s disease by modifying α-synuclein transcription2014

    • Author(s)
      Hodaka Yamakado, Takeshi Asano, Ryosuke Takahashi
    • Organizer
      第55回日本神経学会学術大会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2014-05-24 – 2014-05-24

URL: 

Published: 2016-06-01  

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