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2015 Fiscal Year Research-status Report

25(OH)D3によるガン細胞増殖抑制に関する研究

Research Project

Project/Area Number 26860714
Research InstitutionFujita Health University

Principal Investigator

宗綱 栄二  藤田保健衛生大学, 医学部, 助教 (30600431)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
KeywordsビタミンD
Outline of Annual Research Achievements

前年度の結果から25(OH)D3が活性型に変換されることなく、ビタミンD受容体に直接結合し作用することがやはり強く示唆されたので、本年度はこの現象の分子メカニズムについて調べた。マイクロアレイの結果より、シスタチンやセマフォリンといった増殖抑制作用があるタンパクに注目した。これらの分子はビタミンDとの関連が指摘されていない分子である。興味深い事ことに、ビタミンD増殖抑制作用が見られるPZ-HPV-7細胞ではシスタチン、セマフォリンの転写はビタミンD処理により増加した。しかし、増殖抑制作用が観察されないDU-145細胞では転写活性化は観察されなかった。この影響がDNAのメチル化やヒストン修飾によるものではないかと考え、DU145細胞にDNAメチル化阻害剤の5azaシチジンを作用させたところ、処理後24時間後には約2倍にセマフォリンmRNA量が増加していた。これにビタミンDを作用させると約4倍に増加した。同様にヒストン脱アセチル化阻害剤を作用させたところ、4倍に、さらにビタミンDを作用させると約8倍に転写が活性化された。同様の結果はシスタチンでも観察された。これら一連の実験から、ビタミンDによる増殖抑制がみられない細胞では、シスタチンやセマフォリンのプロモーター部位はメチル化され、ビタミンDレセプターがDNAに結合できないのではないかと考えている。またシスタチンやセマフォリンのプロモーター部位のメチル化率を測定するためにパイロシーケンサーを用いて解析中であるが、まだ実験条件が確立できず、うまくはかれていない。来年度は引き続きメチル化率の解析を行いたい。またこれら分子を過剰発現させ、実際に細胞増殖抑制が見られるかも確認しないといけない。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

セマフォリン、シスタチンのメチル化解析がうまくいかず時間がかかってしまっている。
今後は過剰発現細胞の構築など、他の実験と並行して進めて行く。

Strategy for Future Research Activity

概ね計画書通り進めていく。
ビタミンDレセプターがリガンド結合なしで核内移行する現象が見られたので、
このことが増殖抑制とどのように関わっているかも含めて順次解析していく。

Causes of Carryover

予定している実験に用いる試薬 (リアルタイムPCR試薬など)や抗体をまだ購入していないため差額が生じている。

Expenditure Plan for Carryover Budget

必ず必要となる試薬なので、上記未購入品に充てる予定である。

  • Research Products

    (1 results)

All 2016

All Journal Article (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 1 results)

  • [Journal Article] Metabolism and Action of 25-Hydroxy-19-nor-vitamin D3 ih human prostate cells2016

    • Author(s)
      Munetsuna E, Kittaka A, Chen TC, Sakaki T
    • Journal Title

      Vitamins and Hormones

      Volume: 100 Pages: 357 - 77

    • DOI

      10.1016/bs.vh.2015.10.009

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2017-01-06  

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