2015 Fiscal Year Research-status Report
NK細胞へのIL-21遺伝子導入: 新たな細胞療法の開発
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26860785
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Research Institution | Niigata University |
Principal Investigator |
高地 貴行 新潟大学, 医歯学総合病院, 助教 (70444164)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | NK細胞 / 細胞療法 / 遺伝子改変 / IL-21 |
Outline of Annual Research Achievements |
NK細胞の悪性腫瘍細胞に対する細胞障害活性を向上する手段として、IL-21遺伝子導入の有効性を検証している。IL-21分泌型、あるいは、細胞障害活性を持ちIL-21サイトカインの全身作用抑制を期待する膜結合型を作成し、細胞障害活性を中心に、細胞機能評価を実施し、臨床応用の可能性を模索している。 初回のIL-21発現ベクターによる遺伝子導入NK細胞の細胞障害活性をK562細胞株で確認するとmockNK細胞と顕著な差異は認めなかった。これについては、はじめのベクターは、クローニングにEcoRIを切断してベクターに乗せ換えするため、IL-21mRNA配列中に含まれるEcoRI配列を変化させていた。このことがIL-21発現NK細胞の細胞障害活性に関与する可能性を考え、EcoRI配列をもとに戻したIL-21発現ベクターを作成し、体外増幅NK細胞にIL-21遺伝子導入した。そのNK細胞の細胞障害活性を評価したところ試験実験で細胞障害活性上昇を認めたため、機能評価を開始した。 IL-21発現を認め、パーフォリン、グランザイムBを細胞質内に含み、かつmockNK細胞よりも高発言していことをFACSで確認した。細胞障害活性については、mock導入NK細胞に比して増強していた。遺伝子導入NK細胞の対外増幅効率についてはmockNK細胞と比較しても変化はなく、IL-2添加せず培養したところでもNK細胞寿命の延長効果は認めなかった。膜結合型IL-21(mbIL-21)発現レトロウイルスも作成したし、同様の機能を確認している。今後も分泌型IL-21発現NK細胞とmbIL-21発現NK細胞との機能評価を継続する予定である。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
分泌型と膜結合型のIL-21遺伝子導入ベクターを作成し、体外増幅したNK細胞に導入した。IL-21発現を確認できた。今年度以降に、IL-21遺伝子導入NK細胞機能評価を継続することを目標としていた。 IL-21遺伝子導入NK細胞の評価項目として、分泌型と膜結合型の双方について、IL-21産生能、IL-21導入NK細胞増幅効率、細胞障害活性、IFN-γ産生能、遺伝子導入NK細胞の寿命、STAT3発現、TERT発現などを挙げた。 これまでに、IL-21産生は確認済みで、IFN-γではなくパーフォリン、グランザイムBの発現確認に変更したが分泌機能についても確認できた。IL-21遺伝子導入NK細胞の増幅効率と細胞障害活性は評価を開始し、繰り返している。機能評価が可能となったことは進捗としては順調といえる。 マウスモデルは導入できていない。
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Strategy for Future Research Activity |
現在評価を開始した項目については、継続し、その効果を検証する。まずはIL-21導入NK細胞の細胞障害活性や寿命延長効果を繰り返す実験で確認していく。 目標評価項目の一部は未だ準備できていないため、準備を進める。mock導入NK細胞の他に、IL-2/IL-7/IL-15遺伝子導入NK細胞機能との比較を予定していたが、一部はIL-2遺伝子導入NK細胞のみとの比較はしているが、すべての遺伝子導入NK細胞との比較はできていない。テロメア長とテロメアーゼ活性については、IL-21導入NK細胞の寿命延長効果の有無を再確認し、寿命延長を果たさない場合に検索するかは検討を要する。細胞障害活性の増強が強く抗腫瘍効果が十分期待できると判断した場合にマウスモデルを考慮する。
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Causes of Carryover |
ほぼ計画に従い使用し、年度末残高は18,645円である。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究に必要な情報収集のための学会参加費あるいは実験に必要な抗体などの消耗品購入に充填する。
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