アミノ基特異的誘導体化LC-MS分析による川崎病のバイオマーカー検出

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26860809
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 楠田 剛 九州大学, 大学病院, 助教 (90710533)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 川崎病 / 質量分析計

Outline of Annual Research Achievements

NOD1のリガンドであるFK565を0, 10, 50 pmol/mlの濃度に振り, それぞれ高感度”TNBS アミノ基誘導体化 LC-MRM-MS/MS法を用いて測定した. 結果, NOD1リガンドの濃度とarea rationはきれいな標準直線が書けた.
まずは, TNBSアミノ基誘導体化せずに川崎病患者 (n=117)血清中の特異的物質を質量分析計を用いて検索したところ, m/z=1531.8, 1414.3, 790.9, 779.8, 695.0 (以上第1期間), 1171.4, 1169.4, 906.8, 695.0 (以上第2期間), 667.4, 619.4と409.3 (以上第3期間)の複数の特異的物質を見つけ出した. コントロールは疾患コントロール (n=101)と正常コントロール (n=5)を用いた. 但し, それぞれの特異的物質の感度は9.3～81.8%とばらつきが大きかった. 特異度は100%であった. また, これらの物質はバイオマーカーの候補にはなるが, 一定期間を過ぎると検出されなくなった. この事は, 本疾患がそれぞれの流行毎に類似した臨床症状を示す報告と一致している. 加えて, 各々の特異的物質と臨床情報 (有熱期間と眼球結膜充血・四肢硬性浮腫・皮疹・非化膿性頚部リンパ節腫脹・いちご舌の有無, WBC, CRP, ALT, γ-GTP, 総ビリルビン)との関連を調べたが, 明らかな関連性は見いだせていない.

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

川崎病特異的物質を検出した.

Strategy for Future Research Activity

検出した特異的物質の感度にばらつきが大きく, TNBSアミノ基誘導体化を用いて再検討する. 更に症例数を増やし, 臨床症状や血液検査データとの関連性も調べる.

Research Products

• [Journal Article] Kawasaki disease-specific molecules in the sera are linked to microbe-associated molecular patterns in the biofilms. (2014)
  • Author(s): Kusuda T, Nakashima Y, Murata K, Kanno S, Nishio H, Saito M, Tanaka T, Yamamura K, Sakai Y, Takada H, Miyamoto T, Mizuno Y, Ouchi K, Waki K, Hara T
  • Journal Title: Plos One Volume: 9 Pages: e113054
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0113054
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Identification of Kawasaki Disease-specific Molecules in the Sera and Microbe-associated Molecular Patterns (2015)
  • Author(s): Takeshi Kusuda, Yasutaka Nakashima, Kenji Murata, Shunsuke Kanno, Toshiro Hara
  • Organizer: Eleventh International Kawasaki Disease Symposium
  • Place of Presentation: Hawaii
  • Year and Date: 2015-02-04 – 2015-02-04
• [Presentation] Microbe-associated molecular patterns (MAMPs) in the biofilms: A possible cause of Kawasaki disease (2014)
  • Author(s): Takeshi Kusuda, Yasutaka Nakashima, Kenji Murata, Toshiro Hara
  • Organizer: The 34th Annual Meeting of the Japanese Society of Kawasaki Disease
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2014-10-30 – 2014-10-30
  • Invited