アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターを用いた BTK遺伝子修復研究

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26860811
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 山元 裕之 九州大学, 環境発達医学研究センター, 学術研究員 (00710170)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクター / BTK遺伝子 / CD34陽性造血幹細胞

Outline of Annual Research Achievements

ターゲティング効率の向上を目的として、改良型アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターを作製した。CD34陽性造血幹細胞における相同組換えの検出に適する薬剤耐性遺伝子を検討した。
In vitroでの骨髄CD34陽性造血幹細胞からのB細胞系への分化能を評価するため、正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞と同様に、骨髄CD34陽性造血幹細胞からのB細胞系への分化誘導を試み、フィーダー細胞、サイトカインの種類、濃度などの条件を検討した。
ヒト血球系細胞株において、アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターと人工ヌクレアーゼの併用時のターゲティング効率を算定した。同様に、正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞からのコロニーアッセイにおいて、アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターと人工ヌクレアーゼの併用時のターゲティング効率を算定した。結果、ヒト血球系細胞株及び正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞のターゲティング効率は、ともに高効率であった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターと人工ヌクレアーゼを併用することで、ターゲティング効率の向上を認めた。

Strategy for Future Research Activity

平成26年度に得られた結果を基にして、in vitroで正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性造血幹細胞のターゲティング・B細胞系への分化誘導実験を試みる。ヒトXLAモデルマウスを用いた遺伝子ターゲティング解析とB細胞再構築の検討を行う。

Causes of Carryover

実験に使用を予定していた細胞培養用の培地が、製造過程で問題が発生し納期が大幅に遅れたため、B細胞系への分化誘導実験の一部を行うことができなかったため、次年度使用額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性細胞でのターゲティング・B細胞系への分化誘導実験を行い、その経費に充てることにしたい。