新生児慢性肺疾患の重症化に関わるマイクロ ＲＮＡの同定と臨床応用への検討

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26860850
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 郷 勇人 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (30443857)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: miRNA / 高濃度酸素暴露 / 新生児慢性肺疾患 / Exosome

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、まだ明らかにされていない慢性肺疾患の発症や重症化のメカニズムについて、マイクロRNA（以下miRNA）に重点をおき、新生児慢性肺疾患罹患児の臨床検体と新生仔慢性肺疾患モデルを用いて、発症や重症化に関わる標的miRNAとメッセンジャーRNA(以下mRNA)を同定することと標的miRNAの促進剤（mimic）,阻害剤（inhibitor）を本疾患モデルマウスに投与し、その効果を分子生物学的、呼吸生理学的、病理組織学的に検討することである。
平成26年度は、本疾患の重症化モデルマウスを作製した。高濃度（95％）酸素を168時間暴露したモデルマウス肺をHE染色し、Radial Alveolar Count(RAC)を行い、コントロール群（非酸素暴露群）に比べ、有意にRACが減少していることを確認した。また、高濃度酸素暴露群とコントロール群のマウス肺からtotal RNAを抽出後、バイオアナライザ2100を用いて、RNA Integrity Number(RIN)を測定し、質の良好なRNAを抽出できたことと、miRNAも抽出されていることを確認した。
臨床検体については、福島県立医科大学の倫理委員会の承認を得た後に、当院NICUに入院した児の臍帯血の血清と児の血清を-80℃で保存しはじめた。一部の検体を用いて、血清からExosomeの抽出を行い、Exosomeに特異的に発現しているCD9、CD63などの蛋白をウェスタンブロッティングにより検出し得たを確認した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

研究がやや遅れている理由としては、新生児の検体からのExosome抽出の確認のため行ったウェスタンブロッティングに予想以上の時間を費やしたことと、臨床検体において目標としている検体数に達していないことである。

Strategy for Future Research Activity

現在は新生児血清からのExosome抽出はできていることは確認でき、検体数も目標に到達しつつあるので、平成２７年度中にマウス肺と新生児の血清を用いてmiRNAアレイ解析を行い、標的miRNAを同定していく予定である。

Causes of Carryover

当初は、アレイ結果ののデータ解析を県外で行う際の交通費に使用する予定であったが、アレイ解析が次年度に塩基となったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

アレイ解析を次年度に行う際の交通費に使用する。