肺がんの複雑な遺伝子変異を利用した腫瘍浸潤リンパ球療法の開発を目指した基礎的検討

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26861133
• Research Institution: National Cancer Center Japan
• Principal Investigator: 吉川 聡明 国立研究開発法人国立がん研究センター, 先端医療開発センター, 研究員 (00625957)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 肺がん / 遺伝子変異由来抗原 / 腫瘍浸潤リンパ球

Outline of Annual Research Achievements

本研究では肺がん患者に対する免疫療法を開発するため、患者個々で異なる遺伝子変異に由来する抗原を認識したTILを使用することの有効性を調べることを目的とした。抗原ペプチド候補の中から実際にTILが認識しているペプチドを同定するには、自己のターゲット細胞にペプチドを提示させ、TILとの反応性を調べる必要があるが、患者一人に100種類以上ある遺伝子変異各々に対してペプチドを用意することは非常に困難である。そのため、ターゲット細胞にペプチドを提示させる方法として、変異部位を含む長鎖ペプチドをコードするmRNAをin vitro合成し、導入して発現させる方法を検討した。実験系構築のためのモデル抗原としてGlypican-3 (GPC3)を用い、CTLには我々が以前樹立したGPC3ペプチド特異的CTLクローンを使用した。GPC3全長のmRNA、およびGPC3由来長鎖ペプチドのmRNAともにターゲット細胞に導入することで、細胞内で発現しプロセスされ、ペプチドがHLA分子に結合して提示され、CTLクローンによって認識されることをIFN-γ ELISPOT解析で確認した。また、一過性の発現であることやタンパク発現と抗原提示の時間差を考慮しmRNA導入からCTLと反応させるまでの時間を検討すると、CTLの反応は大きく異なり、最適な時間の設定を行った。これらより次世代シーケンサー解析から選出した多数の遺伝子変異由来候補ペプチドの中からTILが認識する抗原ペプチドを効率良くハイスループットに同定するための実験系を確立した。現在、実際の肺がん患者切除検体を用いた解析も開始しており、今後、Patient-derived xenograft (PDX)の技術によるがん細胞株の樹立も試み、TILの自己がん細胞に対する傷害性を確認することで、肺がん患者でのTILを使用した個別化細胞移入療法の開発を目指す。

Research Products

• [Journal Article] Vaccination with liposome-coupled glypican-3-derived epitope peptide stimulates cytotoxic T lymphocytes and inhibits GPC3-expressing tumor growth in mice. (2016)
  • Author(s): Iwama T, Uchida T, Sawada Y, Tsuchiya N, Sugai S, Shimomura M, Yoshikawa T, Zhang R, Uemura Y, Nakatsura T.
  • Journal Title: Biochem. Biophys. Res. Comm. Volume: 469 Pages: 138-43.
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2015.11.084.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Hepatocellular carcinoma cell sensitivity to V9V2 T lymphocyte-mediated killing is increased by zoledronate. (2016)
  • Author(s): Sugai S, Yoshikawa T, Iwama T, Tsuchiya N, Ueda N, Fujinami N, Shimomura M, Zhang R, Kaneko S, Uemura Y, Nakatsura T.
  • Journal Title: Int. J. Oncol. Volume: 48 Pages: 1794-1804
  • DOI: 10.3892/ijo.2016.3403.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Enhancement of anti tumor effect by peptide vaccine therapy in combination with anti-CD4 antibody: Study in a murine model. (2016)
  • Author(s): Fujinami N, Yoshikawa T, Sawada Y, Shimomura M, Iwama T, Sugai S, Kitano S, Uemura Y, Nakatsura T.
  • Journal Title: Biochemistry and Biophysics Reports. Volume: 5 Pages: 482-491
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] マウスモデルを用いた抗CD4抗体投与併用によるがんペプチドワクチン療法の効果増強の検討 (2015)
  • Author(s): 藤浪紀洋、吉川聡明、澤田雄、下村真菜美、植村靖史、中面哲也
  • Organizer: 第28回日本バイオセラピィ学会
  • Place of Presentation: 川越
  • Year and Date: 2015-12-03 – 2015-12-04
• [Presentation] The enhancement of the antitumor effect by peptide vaccine therapy in combination with anti-CD4 antibody:Study in murine model (2015)
  • Author(s): Fujinami N, Yoshikawa T, Sawada Y, Shimomura M, Uemura Y, Nakatsura T.
  • Organizer: 第44回日本免疫学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 札幌市
  • Year and Date: 2015-11-18 – 2015-11-20
• [Presentation] マウスモデルを用いた抗CD4抗体併用によるがんペプチドワクチン療法の効果増強の検討 (2015)
  • Author(s): 藤浪紀洋、吉川聡明、澤田雄、下村真菜美、植村靖史、中面哲也
  • Organizer: 第43回日本臨床免疫学会総会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-10-22 – 2015-10-24
• [Presentation] Phase II trial of the GPC3-derived peptide vaccine as an adjuvant therapy for hepatocellular carcinoma patients. (2015)
  • Author(s): Sawada Y, Yoshikawa T, Ofuji K, Yoshimura M, Tsuchiya N, Endo I, Nakatsura T.
  • Organizer: 第74回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
• [Presentation] Phase I study of vaccine therapy with a cocktail of peptides for pediatric patients with refractory solid tumors. (2015)
  • Author(s): Hosono A, Kaneda H, Hara J, Nitani C, Yoshikawa T, Kohashi K, Nakatsura T.
  • Organizer: 第74回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
• [Presentation] Vaccination of GPC3-derived peptide-coupled liposome inhibits GPC3 expressing tumor growth. (2015)
  • Author(s): Tsuchiya N, Iwama T, Uchida T, Shimomura M, Yoshikawa T, Fujinami N, Saito Y, Uemura Y, Nakatsura T.
  • Organizer: 第74回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
• [Presentation] Regulation of IL-12 family cytokine/Osteopontin balance in DCs by ligand activation of iNKT cells. (2015)
  • Author(s): Iwama T, Suzuki M, Liu T, Zhang R, Yoshikawa T, Shimomura M, Nakatsura T, Kuzushima K, Uemura Y.
  • Organizer: 第74回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
• [Presentation] GPC3ペプチドワクチンを用いた肝細胞がん根治的治療後補助療法の臨床第II相試験におけるバイオマーカー探索 (2015)
  • Author(s): 中面哲也、澤田雄、吉川聡明、髙橋真理、大藤和也、吉村麻友子
  • Organizer: 第35回日本分子腫瘍マーカー研究会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-07
• [Presentation] ヒト健常人・がん患者血液を用いたヒト化抗CD4 抗体（IT1208）によるin vitro でのCD4 陽性細胞除去の検証 (2015)
  • Author(s): 下村真菜美、正田香世子、吉川聡明、須貝詩織、北野滋久、横地祥司、伊藤哲、松島綱治、植村靖史、中面哲也
  • Organizer: 第35回日本分子腫瘍マーカー研究会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-07
• [Presentation] GPC3 expression could be the biomarker of the GPC3-derived peptide vaccine as an adjuvant therapy for hepatocellular carcinoma patients: Results from phase II trial. (2015)
  • Author(s): Sawada Y, Yoshikawa T, Ofuji K, Yoshimura M, Tsuchiya N, Endo I, Nakatsura T.
  • Organizer: がん免疫療法・マクロファージ国際会議2015
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-07-09 – 2015-07-11
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] HLA class I expression in and out of a tumor: Promising new findings for antigen-specific cancer immunotherapy. (2015)
  • Author(s): Nobuoka D, Takahashi M, Yoshikawa T, Yagi T, Fujiwara T, Nakatsura T.
  • Organizer: がん免疫療法・マクロファージ国際会議2015
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-07-09 – 2015-07-11
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Phase I study of vaccine therapy with a cocktail of peptides for pediatric patients with refractory solid tumors. (2015)
  • Author(s): Hosono A, Kaneda H, Hara J, Nitani C, Kohashi K, Manabe A, Yoshikawa T, Nakatsura T.
  • Organizer: がん免疫療法・マクロファージ国際会議2015
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-07-09 – 2015-07-11
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] HLA class I expression in a tumor is higher than that out of a tumor: Promising new findings for antigen-specific cancer immunotherapy. (2015)
  • Author(s): Nobuoka D, Takahashi M, Yoshikawa T, Yagi T, Fujiwara T, Nakatsura T.
  • Organizer: AACR 106th Annual Meeting 2015
  • Place of Presentation: アメリカ
  • Year and Date: 2015-04-18 – 2015-04-22
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Phase II study of the GPC3-derived peptide vaccine as an adjuvant therapy for hepatocellular carcinoma patients. (2015)
  • Author(s): Sawada Y,Yoshikawa T, Ofuji K, Yoshimura M, Tsuchiya N, Takahashi M, Nobuoka D, Mizuno S, Endo I, Nakatsura T.
  • Organizer: AACR 106th Annual Meeting 2015
  • Place of Presentation: アメリカ
  • Year and Date: 2015-04-18 – 2015-04-22
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Efficient crosspresentation of oncofetal antigen (Glypican-3)-derived long peptides encompassing CTL and promiscuous Th cell epitopes using a novel liposome. (2015)
  • Author(s): Mohammad A.S, Tomita Y, Yuno A, Hirayama M, Irie A, Tsukamoto H, Senju S, Yuba E, Yoshikawa T, Kono K, Nakatsura T, Nishimura Y.
  • Organizer: AACR 106th Annual Meeting 2015
  • Place of Presentation: アメリカ
  • Year and Date: 2015-04-18 – 2015-04-22
  • Int'l Joint Research