Characterization of tympanic border cells as progenitors for mouse cochlea cells

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26861372
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 谷口 美玲 京都大学, 医学研究科, 客員研究員 (80706713)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 内耳再生 / 内耳幹細胞 / 遺伝子解析

Outline of Annual Research Achievements

本研究の「目的」および「研究実施計画」は、tympanic border cell近傍の内耳幹細胞の遺伝子発現を解析し、その制御メカニズムを解明することにより、内耳再生による感音難聴治療法の開発を行うことである。研究期間（4年）を通じて、何度も実験に行き詰ったが、最終的に以下の知見を得ることができた。
１）内耳サンプルのLCM（Laser captured microdissection）法の確立：抽出されたRNAサンプルの質および量をマイクロアレイレベル（最低10 ngのRNAかつRIN値が7以上）にするための改良を行った。結果得られた知見は以下の通りであった。まず、固定（脱灰）サンプルよりも未固定サンプルが良かった。次に、未固定だと切片の形状がかなり悪いため、tympanic border cellを特定するためのレポーターマウスの使用が必要であった。細胞種特定のための染色法には限界があった。さらに、採取細胞は少なくとも100個必要であると考えられた。
２）内耳幹細胞の遺伝子発現の解析：１）の確立に時間を要したため、LCMを用いない方法にてtympanic border cell近傍の内耳幹細胞の発現遺伝子の確認を試みた。当科で得られたマイクロアレイデータ（伊木ら、PLoS One. 2017;12:e0179901.）から、内耳幹細胞の候補となる遺伝子をいくつか抽出し、抗体による内耳切片の免疫組織染色を行った。その結果、tympanic border cell近傍で染まった分子が見つかった。
本研究で得られた成果の一部は新たな知見であり、今後の内耳研究における発展を願う。