2015 Fiscal Year Research-status Report
眼内増殖性疾患における硝子体液中のmicroRNAの発現解析とその機能解析
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26861469
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
大内 亜由美 順天堂大学, 医学部, 助教 (80645664)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | マイクロRNA / 増殖糖尿病網膜症 / 増殖硝子体網膜症 / 硝子体 / 上皮間葉系移行 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
硝子体中miRNAの網羅的発現解析においてmicroRNA-21 (miR-21)が眼内増殖疾患硝子体中で有意に発現上昇していることを見出し、miR-21の網膜硝子体疾患硝子体中の発現解析、および機能解析を行った。
黄斑円孔、裂孔原性網膜剥離、増殖硝子体網膜症、増殖糖尿病網膜症において硝子体中miR-21の発現を検討したところ、miR-21が、増殖病態特異的に硝子体中で発現上昇していることが明らかとなった。眼内増殖疾患硝子体中で発現上昇しているmiR-21が増殖病態に機能を有するか、in vitroで検討した。ヒト網膜色素上皮細胞株 (ARPE-19)にTGFβ2にて上皮間葉系移行を誘導するとmiR-21の発現レベルが上昇した。次にmiR-21の機能解析を行う為にmiR-21 mimicおよびinhibitorを用いて解析行った。mirna標的検証用3utr gfpレポーター遺伝子を用いてmiR-21 mimicおよびinhibitorの効果を検証したところ、GFPの発現はmiR-21mimicとのコトランスフェクションで消失し、miR-21 inhibitorとのコトランスフェクションで増強した。miR-21 mimicおよびmiR-21 inhibitorは上皮間葉系移行の誘導、および阻害には機能を認めなかったが、増殖および遊走能をCCK-8アッセイ、およびmigration assayで検討したところ、miR-21 mimicは細胞増殖能および遊走能を有意に上昇させ、miR-21 inhibitorはTGFβ2で誘導された細胞遊走能を有意に抑制した。
in vivoでマウスPVRモデルを作成し、miR-21の機能解析を予定していたが、PVRモデルが安定して作成できなかったことから、機能解析が十分に行うことができなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初予定していたin vivoによるmiR-21の機能解析研究は、マウスPVRモデルが安定して作成できなかったことから、今回の期間内に施行できなかったが、臨床検体およびin vitroにてある程度十分な機能解析を進めることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究の経過中、miR-21は血管内皮細胞にもに発現していることが明らかとなり、血管内皮細胞の機能維持に関与している可能性が考えられる。増殖糖尿病網膜症患者硝子体中に有意に存在することから、糖尿病網膜症病態である血管内皮機能不全におけるmiR-21の機能解析も行い、さらなる糖尿病網膜症への病態関与を明らかにしていきたいと考えている。
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| Causes of Carryover |
現在論文投稿後の査読意見に対する追加実験中であり、その分の経費を繰り越しとした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
追加実験に用いる試薬などの経費に用いる予定である。
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