口腔癌に発現する新規バイオマーカーRCAS1の機能解析と臨床応用

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26861730
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 豊嶋 健史 九州大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (20546569)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: RCAS1 / 口腔扁平上皮癌 / バイオマーカー

Outline of Annual Research Achievements

RCAS1は口腔扁平上皮癌(OSCC)において発現しており，免疫組織学的に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)にアポトーシスを誘導していることが証明されたことから，RCAS1がOSCCのバイオマーカーとして有用であるという仮説をたてている．
本研究では，まずin vitroでOSCC細胞におけるRCAS1の発現動態と機能について解析し，次にRCAS1がOSCCのバイオマーカーとして有用であるかを臨床的に検討することを目的としている．そのために，①OSCC由来細胞における膜型および分泌型RCAS1の発現動態を検索する　②OSCC由来細胞が発現するRCAS1によるアポトーシス誘導能について検討する　③膜型，分泌型RCAS1がどのようにアポトーシス誘導能に影響するかを検討する　④OSCC患者の血清中のRCAS1値と臨床病理因子および臨床経過との関連を検索する　という４項目を具体的に挙げている．
初年度には①を実施する予定だった．実際には，OSCC由来細胞株であるHSC-2, HSC-3, SQUU-A, SQUU-Bを培養皿に付着させた後4日間培養を行った．膜型RCAS1の検索は付着完了時に行い，分泌型RCAS1の検索は付着完了時から1,2,3,4日後に行った．Flow cytometry法，Dot blot法，ELISA法を用いて膜型，分泌型RCAS1の発現を確認した．

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

OSCC由来細胞株であるHSC-2, HSC-3, SQUU-A, SQUU-Bを培養皿に付着させた後4日間培養を行った．膜型RCAS1の検索は付着完了時に行い，分泌型RCAS1の検索は付着完了時から1,2,3,4日後に行った．Flow cytometry法，Dot blot法，ELISA法を用いて膜型，分泌型RCAS1の発現を確認した．
これは当初の計画通りの進行具合であり，また結果も今後につながるものであることから，概ね順調に進展していると考える．

Strategy for Future Research Activity

今後の研究の予定は以下の通りである．
②OSCC由来細胞が発現するRCAS1によるアポトーシス誘導能について検討する：OSCC由来細胞株HSC-2, HSC-3, SQUU-A, SQUU-Bを標的細胞であるRCAS1受容体を持つ白血病細胞株K562と日間共培養する．K562のアポトーシスの検索は付着完了時から1,2,3,4日後にFlow cytometry法を用いて行う．
③膜型，分泌型RCAS1がどのようにアポトーシス誘導能に影響するかを検討する：まず，OSCC由来細胞にsiRNAを導入してターゲットであるRCAS1遺伝子をノックダウンして，膜型および分泌型RCAS1の発現が消失することをFlow cytometry法とELISA法で確認する．次にRCAS1の発現動態によるK562のアポトーシス誘導能への影響を確認するために以下の3群を用意して共培養を行い，膜型，分泌型RCAS1によるアポトーシスの程度をFlow cytometry法で測定する．
④OSCC患者の血清中のRCAS1値と臨床病理因子および臨床経過との関連を検索する：RCAS1がOSCCのバイオマーカーとして有用であるかを検討するために，OSCC患者の末梢血を経時的（術前、術中、術後、定期的な経過観察時）に採取し分泌型RCAS1値の測定を行い，臨床病理因子との相関を検討する．またin vitro実験系で，OSCC患者の血清中のRCAS1によるK562の増殖抑制効果を確認する．

Causes of Carryover

以前の研究の延長であることから，細胞株は所持しておりあたらに購入する必要がなかった．また，培養に関する器具や試薬なども有していたことによる．

Expenditure Plan for Carryover Budget

今後は学会発表，論文投稿などの機会が増加することが予想されることより，使用可能と考える．