2014 Fiscal Year Research-status Report
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26861761
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Research Institution | Hyogo Medical University |
Principal Investigator |
山村 倫世 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (70647883)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | TGF-β / EMT |
Outline of Annual Research Achievements |
運動性の高い単球系破骨前駆細胞は血中から骨へ遊走し、細胞周期の停止した静止期破骨前駆細胞に変化し、骨芽細胞と安定した構造を構築し数週間支持されている。このようなニッチと呼ばれる安定した微小環境の状態へ、運動能の高い破骨前駆細胞を誘導し、静止・維持させる因子は明らかでない。細胞が接着性の高い上皮細胞から運動性の間葉系様細胞に形質変化する現象を上皮間葉転換(epithelial-mesenchymal transition: EMT)、またその逆はMETと呼ばれている。EMT/METの概念は、がん研究だけではなく、最近はES細胞やiPS細胞に関する研究にも取り入れられている。TGF-βはがん細胞にEMTを誘導することが知られており、本研究は、破骨前駆細胞におけるTGF-βを介したEMT/METの関与を明らかにすることを目的とした。運動性の高い破骨前駆細胞から静止した破骨前駆細胞への変化を、EMT/METの概念からEMTマーカーおよび細胞運動能に関与するタンパク(CDC42、RAC123、RhoA)発現を比較検討した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初の実験計画では、EMTを誘導するとされているTGF-βとsonic hedgehogをautoclineで産生する線維芽細胞を遺伝子導入にて作成し、当科で培養可能である良性腫瘍細胞(KCOT)および破骨前駆細胞(RAW264.7細胞)に作用させる予定であったが、遺伝子導入が困難であった。そこで,細胞培養液にTGF-β(Human TGF-β1)を添加し,細胞にTGF-β刺激を加える方法に変更して研究を進めているため。
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Strategy for Future Research Activity |
今回結果から細胞形態が細胞接着性の高い紡錘形に変化し、アポトーシスをおこさず安定的に静止した破骨前駆細胞に変化していることが示唆された。今後は,細胞運動能の検討(scratch assay,invasion assay)やTGF-β阻害剤を作用させて,追加実験を行う予定である。
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Causes of Carryover |
当初の実験計画では、EMTを誘導するとされているTGF-βとsonic hedgehogをautoclineで産生する線維芽細胞を遺伝子導入にて作成し、当科で培養可能である良性腫瘍細胞(KCOT)および破骨前駆細胞(RAW264.7細胞)に作用させる予定であったが、遺伝子導入が困難であった。そこで,細胞培養液にTGF-βを添加し,細胞にTGF-β刺激を加える方法に変更して研究を進めており追加実験がになった必要になったため。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
今後は、細胞運動能の検討(scratch assay,invasion assay)やTGF-β阻害(SB43152)を作用させて、追加実験を行い今回の研究関連の学会発表や学術誌へ投稿の予定である。
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