血漿タンパク質LRGの翻訳後修飾に着目した膵癌早期診断マーカーの解析

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26870002
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 柿坂 達彦 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 客員研究員 (40583092)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 膵癌 / バイオマーカー

Outline of Annual Research Achievements

早期発見が困難で、予後不良な疾患である膵癌に対して、早期診断マーカーの発見が望まれている。申請者らはプロテオミクスの手法を用い、leucine-rich alpha-2-glycoprotein（以下LRG）が膵癌患者血漿中で優位に発現量が増加していることを発見した。また、糖タンパクであるLRGには複数のアイソフォームが存在しており、膵癌に特異的なLRGアイソフォームが存在する可能性がある。
本研究は血漿タンパク質LRGの翻訳後修飾に注目した膵癌早期マーカーとしての意義を確立する研究で、1. LRGアイソフォームの同定、2. LRGアイソフォーム測定系の確立、3. 臨床検体を用いたLRGアイソフォームの測定とバイオマーカーとしての意義を確立することを目的としている。
現在、膵癌患者の臨床検体を収集し、ELISAの手法を用いて膵癌患者血漿中のLRG全体量の測定を行っている。また、ヒト血漿から免疫沈降でヒト血漿中LRGの単離を試みている段階である。
今後の予定であるが、ヒト血漿中LRGに結合している糖鎖を酵素で切断して回収し、質量分析の手法を用いて糖鎖構造を同定する。それにより、LRGアイソフォームによる糖鎖の差異を解析する。さらにLRGアイソフォーム測定系を確立し、LRG全体量を測定した検体において、各アイソフォームの比率を測定し、特定のアイソフォーム分画の濃度上昇が膵癌で認められないかを検討する予定である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

膵癌患者血清を用いてLRG全体量を測定しているが、まだ症例数が少なくデータ集積量が不十分な段階である。
ヒト血漿中のLRGの単離もまだ困難な状況が続いており、時間を要している。その後の糖鎖測定に関する手法は確立しているので、速やかにLRG単離を完了させる予定である。その後、質量分析の手法を用いて糖鎖解析を行う。

Strategy for Future Research Activity

膵癌患者血漿中のLRGを非担癌ボランティアのLRGと比較し、カットオフ値を設定し、診断マーカーとしての意義を検討する。また、免疫沈降で血漿よりLRGの単離が終了した段階で、LRGに結合している糖鎖を同定する予定である。糖鎖の同定に関しては、タンパク質に結合している糖鎖を網羅的に解析するグライコブロッティングの手法で解析を予定している。それにより、糖鎖構造の解析に要する時間を短縮可能であると考える。その後、LRGアイソフォームの測定系確立を試みる。
また、臨床検体を用いたLRG全体量、LRGアイソフォームの測定に関しては、膵癌患者の臨床検体の収集を他病院にもお願いして検体数を増やす予定である。また、膵癌患者以外の癌腫においても血漿LRGの測定を行い、他疾患におけるLRG測定の有用性も検討している。それにより、膵癌のみならず、ひろく癌の早期発見マーカーとしての意義も検討する。

Causes of Carryover

今年度の研究計画が予定通り進まず、遅れている状況であり、当初予定していたLRGアイソフォーム同定に必要な物品の購入、解析費用の使用に至らなかったため、次年度使用額が生じることになった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度使用額に関しては、遅れていた研究が進み次第、LRGアイソフォーム同定解析に必要な物品の購入や解析費用に使用する予定である。