抗原のクロスプレゼンテーションによる全身性エリテマトーデス誘導機構の研究

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26870421
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 積山 賢 九州大学, 大学病院, 助教 (20514607)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 抗原のクロスプレゼンテーション / 全身性エリテマトーデス / SLE

Outline of Annual Research Achievements

１．STINGは抗原のクロスプレゼンテーションに関与するか
STING欠損マウスから作製したSTINGを欠損する骨髄由来樹状細胞（BMDC）を用いて、抗原のクロスプレゼンテーションへのSTINGの関与をin vitroにおいて検討した。野生型およびSTING欠損マウスの骨髄細胞をGM-CSFで刺激培養し、BMDCを作製した。このBMDCに卵白アルブミン（OVA）をパルスし、この後、CD8+ T細胞と共培養した（クロスプレゼンテーションアッセイ）。24時間後にCD8+ T細胞の活性化を検討した。その結果、野生型BMDCを用いた場合と比較して、STING欠損型BMDCを用いた場合にはCD8+ T細胞の活性化が減少した。

２．STINGはどのように抗原のクロスプレゼンテーションに関わるか
（１）STINGがSec61と相互作用しているかを解析した。野生型BMDCからタンパクを抽出し、抗STING抗体を用いて免疫沈降を行った。その結果、Sec61はSTINGと共沈した。また同様に、抗Sec61抗体を用いて免疫沈降を行ったところ、STINGはSec61と共沈した。これらのことから、Sec61とSTINGは相互作用していることが示唆された。
（２）STINGが関与するシグナル伝達について検討した。野生型BMDCにOVAをパルス後、STINGを介するシグナル伝達分子の活性化を検討した。しかし、それらの分子群の活性化は見られなかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

STINGが抗原のクロスプレゼンテーションに影響するか否かの検討、およびSTINGが関連分子と相互作用するか否かの検討を、概ね予定通りに完了できたため。

Strategy for Future Research Activity

１．質量分析を行い、抗原のクロスプレゼンテーションにおいてSTINGが相互作用する分子を網羅的に解析する。

２．STINGは全身性エリテマトーデス（SLE）の発症に関与するかを検討する。STING欠損マウスにSLEの発症を誘導し、細胞傷害性T細胞の生成や組織傷害の有無を解析して、抗原のクロスプレゼンテーションへのSTINGの関与をin vivoで検討する。また、SLE発症後の野生型およびSTING欠損マウスのDCを用いてクロスプレゼンテーションアッセイを行い、両マウスのDCにおける抗原のクロスプレゼンテーション能力を解析する。

Causes of Carryover

STINGと他の分子との関連について、当初の予定よりも詳細な検討を行い、この検討を優先して行った。それに伴い、本年度に行う予定であった質量分析を次年度に行うこととした。そのため、質量分析にかかる費用が次年度使用となった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

本年度に行う予定であった質量分析を次年度に行い、この費用として使用する。