Breeding process innovation by short-period-gene-stocking techniques in transgenic plant of tetraploid ruzigrass (Brachiaria ruziziensis).

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26870453
• Research Institution: University of Miyazaki
• Principal Investigator: 石垣 元気 宮崎大学, 農学部, 助教 (80584573)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 耐乾性 / DREB1A遺伝子 / 遺伝子組換え / 暖地型イネ科牧草 / 種間交雑 / ルジグラス / パリセードグラス / シグナルグラス

Outline of Annual Research Achievements

我々は、これまでに２倍体のルジグラス（B.ruziziensis）の多芽体（Ishigaki et al., 2009a）または種子由来幼植物体へのコルヒチン処理により作出した４倍体ルジグラスを用いて、エンブリオジェニックカルスを誘導し、そのカルスにシロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana）由来のDREB1A遺伝子の導入を行った。その結果、DREB1A遺伝子が導入された遺伝子組換え体当代（以下、組換え当代と記す）が5系統得られている。
本申請課題において、これまでに、得られた5系統の組換え当代からT1世代（13個体）を作出、選抜し、これらの組換え体T1世代の乾燥ストレス条件下における耐乾性について調査した。乾燥ストレス処理3日目では、全ての組換え体においてDREB1A遺伝子の発現がRT-PCR解析により確認された。乾燥ストレス処理14日目では、組換え体の一部は、全ての耐乾燥性に関する調査項目（SPAD値、相対的水分含水率）において、非組換え体よりも優れた値を示し、再潅水処理後においても高い緑部割合が認められた。
さらに、これらの組換え体T1世代を種子親として、４倍体アポミクシス草種（B. brizantha, B. decumbens）を花粉親とした種間交雑を行い、得られた交雑種子を発芽させ、PCR解析によりDREB1A遺伝子およびアポミクシス関連遺伝子の両方が遺伝した雑種個体を選抜したところ、シグナルグラスを花粉親とした種間交雑では1個体、パリセードグラスを花粉親とした種間交雑では3個体の計4個体の雑種個体が得られた。