ATP依存性DNaseの反応機構と細胞内の遺伝子組換え過程におけるその役割

1985 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 60440105
• Research Institution: Fujita Health University
• Principal Investigator: 高木 康敬 藤田学園保健衛生大学, 医, 教授 (50037313)
• Keywords: ATP依存性DNase / recBC遺伝子 / 細胞内遺伝子組換え

Research Abstract

ATP依存性DNaseは細菌界に広く分布し、ATP添加を必須としてこれをADPとPiとに開裂、そのエネルギーを用いて二本鎖または一本鎖DNAを末端から分解し、オリゴヌクレオチドを放出するが、環状DNA分子には全く作用しないという特異的な作用を持ち、ATPのエネルギーがDNAの分解反応にいかに利用されているか反応論的に興味深い。一方この酵素タンパクは生命現象に必須な細胞内遺伝子組み換え過程に働くrecBとrecC遺伝子の産物であることが知られており、その作用機構を解析することは組換え過程を理解する手がかりを与えるものと期待される。そこで遺伝的解析にもっとも好都合な大腸菌を材料としてrecBとrecC遺伝子を別々にクローン化し、それぞれの産生タンパクを精製して反応機構を明らかにする目的で本研究を開始した。
本年はその初年度であり、recBC遺伝子を持った組換え体プラスミドからそれぞれの遺伝子を別々にpBR322プラスミドにサブクローン化して多量にあつめ、精製してその全塩基配列の決定に努力した。いずれもきわめて大きい遺伝子であるためrecC遺伝子について部分的に決定したところである。
一方本酵素を精製して、両遺伝子産物に対するモノクローナル抗体をとる実験をくりかえしたが、Cに対する抗体しか出来ず、しかもそれの結合力も弱いため吸着に時間を要し、今後の研究進展に耐えるものはえられなかった。目下方法をかえてさらに試みている。