細胞増殖におけるポリアミンの役割に関する分子生物学的研究

1987 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 61480427
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 五十嵐 一衛 千葉大学, 葉学部, 教授 (60089597)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柏木 敬子 千葉大学, 葉学部, 助手 (80169424) ; 柿沼 喜己 千葉大学, 葉学部, 助手 (80134394) ; 小林 弘 千葉大学, 葉学部, 助教授 (00090473)
• Keywords: ポリアミン / プトレスシン / スペルミジン / スペルミン / 細胞増殖 / 蛋白合成促進 / ポリアミン輸送蛋白 / オルニチン脱炭酸酵素

Research Abstract

(1)61年度に分離した大腸菌ポリアミン輸送蛋白欠損株に,PACYC184プラスミドに組みこまれた野生株のDNA断片をranstormし,ポリアミン輸送蛋白の遺伝子のクローニングを試みた. その結果,プトレスシン輸送蛋白遺伝子のみを含むクローンとプトレスシン及びスペルミジン・スペルミンの2つの輸送蛋白の遺伝子を含むクローンが得られた. 塩基配列を決定しないとはっきりしたことが言えないが,以上の事実はプトレスシン輸送蛋白の遺伝子は2個存在することを示唆する.
(2)ポリアミンによって合成促進をうける大腸菌のMr.62K蛋白質(polyarine induced[PI]protein)の抗体を作製し,PI蛋白の産生を抗原・抗体反応で確認する手法により,(1)と同様な方法でPI蛋白遺伝子のクローニングを試みた. その結果,PI蛋白の遺伝子を含む2つのクローンが得られたので,塩基配列を決定する実験を目下継続中である.
(3)牛リンパ球の細胞増殖はポリアミン欠乏により阻害される. その際,チミジンキナーゼ合成が他の酵素に比べ著しく低下したので,その原因を究明した. チミジンキナーゼのmRNA量をNorthern blot aanalysisで測定したところ,mRNA量はポリアミン欠乏によってもほとんど変わらなかったが,ポリゾーム上におけるチミジンキナーゼmRNAは,ポリアミン欠乏により,著しく小さいポリゾーム上に移行していた. この結果は,ポリアミンがチミジンキナーゼ合成を蛋白合成レベルで調節していることを示唆する.
(4)牛リンパ球の細胞増殖におけるオルニチン脱炭酸酵素(ODC)の誘導の引き金にどのような因子が関与しているかを探索した.CAMP依存protein Kinaseとprotein kinase Cが誘導に関与していることが判明したが,これらkenaseの活性化がODCをどのように誘導するかは未だ明らかでない.

Research Products

• [Publications] K.Kashiwagi;K.Igarashi: Biochim.Biophys,Acta. 911. 180-190 (1987)
• [Publications] S.Fujimoto;R.D.Shrestha;M.Ohta;K.Igarashi;F.Encoh;M.Kokuban;S.Koike;Y.Togawa;K.Okui: Jpn.J.Sury.17. 110-117 (1987)
• [Publications] Y.Kakinuma;S.Sakamaki;K.Ito;E.J.Cragce,Jr;K.Igarashi: Arch.Biochem.Biophys.259. 171-178 (1987)
• [Publications] T.Kakegawa;K.Takamiya;T.Ogawa;Y.Hayashi;S.Hirose;M.Niitu;K.Samejima;K.Igarashi: Arch.Biochem.Biophys.261. (1988)
• [Publications] S.Nakaike;K.Kashiwagi;K.Terao;K.Iio;K.Igarashi: Jpn>J,Can>ROS.(Gann). 79. (1988)
• [Publications] K.Kashiwagi;K.Igarashi: Moleular Genetics(Life Suence Advantes). 7. (1988)