遺伝子操作による肝マンナン結合タンパク質の構造と機能に関する研究

1988 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 61480429
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 川嵜 敏祐 京都大学, 薬学部, 助教授 (50025706)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 菅原 一幸 京都大学, 薬学部, 助手 (60154449)
• Keywords: レクチン / マンナン結合タンパク質 / cDNA / ノーザン分析 / mRNA

Research Abstract

1.ラット肝マンナン結合タンパク質mRNAの多様性
昨年度の研究により調製したラット肝マンナン結合タンパク質の全翻訳領域を含むcDNAをプローブとしてラット肝mRNAのノーザン分析を行ったところ、1.0kbの主要成分の他、3.3kbの少量成分の存在が明らかとなった。先に得たcDNAは全翻訳領域およびポリA領域を含む874bより成ることから低分子mRNAに対応するものと考えられる。このmRNAの多様性の意味を探るため、高分子mRNAに対するcDNAの単離を試みた。低分子cDNAをプローブとして別のcDNAライブラリーを検索した結果、全長約3.3kbのcDNA塩基配列を決定することができた。高分子cDNAの翻訳領域732bの配列は低分子cDNAのものと完全に一致していたが、3′側非翻訳領域は長く2403bにも達し、また、5′側非翻訳領域189bの内の5′端90塩基の配列は低分子cDNAのそれと全く異なるものであった。mRNAの多様性を生じる分子機構およびその生理的な意味が注目される。
2.ヒト肝臓マンナン結合タンパク質の部分アミノ酸配列の決定
本研究においてすでにヒト肝マンナン結合タンパク質のものと推定されるcDNAを単離し塩基配列を決定している。しかしながら、これらが真にヒト肝マンナン結合タンパク質であることを確証するためには本結合タンパク質のアミノ酸配列を出来るだけ多く知る必要がある。今回、新たに調製したヒト肝マンナン結合タンパク質約400μgを環元カルボキシメチル化したのち、リジルエンドペプチダーゼ消化し、消化物を逆相HPLCで分画した。得られた夫々のピークについてペプチドシーケンサーを用いてアミノ酸配列を決定している。現在までに得られた配列はいずれもDNA塩基配列より求めたものと一致していた。したがって先に報告者らの決定した塩基配列の正しさが裏付けられれた。

Research Products

• [Publications] S,Oka: Arch,Biochem,Biophys.260. 257-266 (1988)
• [Publications] K,Mori: Arch,Biochem,Biophys.264. 647-656 (1988)
• [Publications] M,Ii: Biochem,Biophys,Res,Commun.155. 720-725 (1988)
• [Publications] M,Ii: J,Biochem.104. 730-734 (1988)
• [Publications] 川嵜敏祐: 実験医学. 6. 28-32 (1988)
• [Publications] 川嵜敏祐: 日本臨床. 1989年夏期増刊「リセプター」. (1989)