血液凝固線溶系調節機構の分子生物学的・生化学的解析

1986 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 61480459
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 小出 武比古 新大, 医学部, 講師 (60018695)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小谷 昌司 新潟大学, 医学部, 助手 (60018702)
• Keywords: 血液凝固 / 線溶制御 / 高ヒスチジン糖タンパク質 / 遺伝子クローニング / 遺伝子構造 / シスタチンスーパーファミリー / ホモロジー

Research Abstract

1.血液凝固線溶系の調節タンパク質として機能する高ヒスチジン糖タンパク質(HRG)cDNAの全塩基配列(2067塩基対)を決定し発表した。
2.HRG遺伝子の構造解析
(1)完全長cDNAをプローブとしてヒト遺伝子ライブラリーをスクリーニングして7種のクローンを単離し、それぞれを液体培養法で大量に培養後、精製した。
(2)制限酵素消化、ゲル電気泳動、サザンブロット法で、各クローンを詳細に解析した結果、3つの重複するクローンでHRG遺伝子の全体が含まれる事が示唆され、その全長はおよそ9kbと推定された。
(3)制限酵素EcoRIで各遺伝子断片をファージベクターから切り出し、プラスミドベクターpUC9にサブクローニングして構造解析に必要な量のDNAを調製し、それぞれについて精密な制限酵素地図を作成した結果、HRG遺伝子は少なくとも5つのエクソンと4つのイントロンで構成されることが推定された。
3.HRGはヘパリンに高い親和性を有し、アンチトロンビン【III】と競争的に結合することにより、アンチトロンビン【III】の凝固因子阻害能を調節していると考えられているが、両タンパク質のヘパリン結合部位に共通構造の存在することを見いだした。
4.HRGとキニノゲンのアミノ酸配列は両タンパク質の高ヒスチジン領域において高い相同性があることは既に報告したが、今回さらに詳しく研究した結果、キニノゲンのN末端領域に存在する3つのシスタチンドメインがHRGにも2つ存在し、両タンパク質は分子進化的に非常に近似しており、少なくとも部分的に同一の祖先タンパク質から進化してきたものであることが明らかになった。

Research Products

• [Publications] Takehiko Koide: Biochemistry. 25. 2220-2225 (1986)
• [Publications] Takehiko Koide: FEBS LETTERS. 194. 242-244 (1986)
• [Publications] 小出武比古: 生化学. 58. 635 (1986)
• [Publications] Takehiko Koide: Thrombosis and Haemostasis. 58. (1987)
• [Publications] Takehiko Koide: FEBS LETTERS.
• [Publications] Takehiko Koide: "New Prospects In Fibrinolysis-1" John Libbey & Company Ltd.,(1987)
• [Publications] 小出武比古: "血液凝固の制御機構" 西村書店, (1987)